操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：Akt抑制劑（AKT Kinase Inhibitor）

英文名稱：AKT Kinase Inhibitor

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg

產品貨號：BJ-01X8612

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

人 CLEC4F 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽CASPASE-8蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒  25次

人 BMP15 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽細胞CASPASE-9蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒  10/20次

人 HFE 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽載玻片細胞CASPASE-9蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

人 RAET1G 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

人 CLEC12A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽石蠟切片組織CASPASE-9蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

人 BTLA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽載玻片細胞CASPASE-9蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

人 CLEC3A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

人 NEUROG3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽石蠟切片組織CASPASE-9蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

人 IFNL3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽細胞CASPASE-9蛋白表達比色法定量檢測試劑盒  10/50 次

人 MAP3K7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽細胞CASPASE-9蛋白表達熒光定量檢測試劑盒  10/50 次

人 NDST1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽CASPASE-9蛋白表達西方雜交分析試劑盒  5次

Akt抑制劑（AKT Kinase Inhibitor）WNT2B  信號通路Wnt2B抗體 規格: 0.1ml

AX2R/LOC389289  膜粘連蛋白2受體抗體 規格: 0.2mlANKRD11  錨蛋白重復結構域蛋白11抗體 規格: 0.2ml

WSB2/WD SOCS box protein 2  信號傳導抑制蛋白WD重復蛋白2抗體 規格: 0.2ml

CNR2/CB2  鈣粘蛋白相關的神經受體2抗體 規格: 0.1ml

Torc2/Crtc2  CREB轉錄共激活因子TORC2抗體 規格: 0.1ml

MAP2/MAP-2a.b.c  微管相關蛋白2抗體 規格: 0.1ml

CST8/Cystatin 8  胱抑素8/半胱蛋白抑制劑8抗體 規格: 0.2mlMTP18  線粒體蛋白18抗體 規格: 0.2ml

Goat Anti-Mouse IgM  羊抗小鼠IgM 規格: 1mg

Emp1/MUC1  表皮膜蛋白1抗體 規格: 0.1ml

Glucose 6 phosphatase alpha  葡萄糖6磷酸α抗體 規格: 0.2ml

phospho-RPS6KA1(Thr348)  磷酸化磷酸化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體 規格: 0.1ml