操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：RET激酶抑制劑（RET Kinase inhibitor 1）

英文名稱：RET Kinase inhibitor 1

產品規格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

產品貨號：BJ-01X8589

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽細胞P16蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒  10/20次

甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽載玻片細胞P16蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽冰凍切片組織P16蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽石蠟切片組織P16蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽載玻片細胞P16蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽凍切片組織P16蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

甲型流感 H7N7 (A/Netherlands/219/2003) Matrix protein 1 / M1 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽石蠟切片組織P16蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒  10/20次

甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) Matrix protein 1 / M1 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽細胞P16蛋白表達比色法定量檢測試劑盒  10/50次

甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) Matrix protein 1 / M1 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽細胞P16蛋白表達熒光定量檢測試劑盒  10/50次

甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) Matrix protein 1 / M1 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽P16蛋白表達西方雜交分析試劑盒  5次

甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) Matrix protein 1 / M1 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽P16蛋白免疫共沉淀分析試劑盒  5次

RET激酶抑制劑（RET Kinase inhibitor 1）Mouse Anti-Guinea pig IgG/Cy5  Cy5標記的小鼠抗豚鼠IgG 規格: 0.1ml

LMW Kininogen/Kininogen 1  低分子量生促進因子抗體（激肽原1） 規格: 0.2ml

TEF3/TEAD4  轉錄增強因子TEF3抗體 規格: 0.2ml

TSPAN20/UPIb  四分子交聯體20抗體（四旋蛋白） 規格: 0.2ml

FGF21  成纖維細胞生因子21抗體 規格: 0.1mlRACK1  受體激活蛋白激C1抗體 規格: 0.2ml

Acinus  Acinus抗體 0.2ml

PLEKHM1  石骨癥相關蛋白PLEKHM1抗體 規格: 0.2ml

Sidekick 1  細胞粘附分子伴侶蛋白1抗體 規格: 0.2ml

TRIB3/p65 interacting inhibitor of NF-kappaB  神經細胞死亡誘導蛋白激抗體 規格: 0.1ml

beta-Actin (Loading Control)  β-肌動蛋白抗體（內參抗體） 0.1mlGoat anti-rat IgG whole serum  羊抗大鼠IgG抗清 規格: 1ml

BASP1/Nap22  腦富含膜附著信號蛋白1抗體 規格: 0.2ml