ELISA試劑盒研發(fā)的靈敏度
此刻可用特定的波長(zhǎng)（450nm）測(cè)讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀，通常指于測(cè)讀ELISA試劑盒研制成果吸光度的光度計(jì)。酶標(biāo)儀的首要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度和可測(cè)范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可準(zhǔn)確到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不該安頓在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室溫宜在15~30℃，運(yùn)用前先預(yù)熱儀器15-30 分鐘，測(cè)讀成果更安穩(wěn)。
測(cè)讀A 值時(shí)，要選用產(chǎn)品的靈敏吸收峰，如OPD 用492nm 波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀，即每孔先后測(cè)讀兩次，*次在zui適波長(zhǎng)（W1），第2次在不靈敏波長(zhǎng)（W2），兩次測(cè)定間不 移動(dòng)ELISA試劑盒研制板的方位，zui終測(cè)得的A 值為兩者之差（W1-W2）。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可削減由容器上的劃痕或指印等構(gòu)成的光攪擾。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗刷劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，然后削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)。
洗板時(shí)留意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需求稀釋，應(yīng)按要求稀釋，所用的水電導(dǎo)率在1.5us/cm 之下，洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后制造。保證洗板浸泡時(shí)刻為40 秒左右，孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越潔凈洗刷作用更好，手藝洗板避免洗液在孔內(nèi)構(gòu)成氣泡。
洗刷在ELISA試劑盒研制過(guò)程中雖不是一個(gè)反響過(guò)程，但卻決議著試驗(yàn)的勝敗。ELISA試劑盒研制就是靠洗刷來(lái)到達(dá)別離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的意圖。通過(guò)洗刷以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反響過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的攪擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗刷時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的攪擾物質(zhì)洗刷下來(lái)。可以說(shuō)在ELISA試劑盒研制操作中，洗刷是zui首要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)厲按要求洗刷，不得馬虎。
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