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D型產氣莢膜梭菌抗體的概念:
Z初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分,故曾把抗體統稱為丙種(γ)球蛋白。后來發現,抗體并不都在γ區;并且位于γ區的球蛋白,也不一定都具有抗體活性
D型產氣莢膜梭菌抗體(antibody,Ab)是機體免疫系統受到抗原刺激后產生的特異性球蛋白,稱免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。根據其重鏈穩定區的分子結構和抗原性的不同,可將為類Ig分為IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大類。由遺傳基因決定所產生的抗體,稱天然抗體(natural antibody),由抗原激發免疫細胞產生的抗體,稱免疫抗體(immune antibody)或稱特異地性抗體。人工制備的特異性抗體又可分為多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體三種類型。
D型產氣莢膜梭菌抗體抗血清的鑒定
抗血清的效價可根據抗體的不同性質,分別采用環狀沉淀試驗、瓊脂雙向擴散、單向免疫擴散、溶血試驗、凝集反應、酶免疫反應及放射免疫等方法進行測定。檢查抗血清的純度可采用免疫電泳、瓊脂雙向擴散及交*反應試驗等方法檢測。
1)取適量Protein A+G Beads懸液,裝入層析柱,用10倍柱體積的PBS(或者TBS,下同)洗滌平衡層析柱。
2)含抗體的血清或其它體液高速離心后,將上清與等體積2×PBS緩沖液混合,調整pH以及離子濃度后(確認pH值為7±0.5),緩慢加入層析柱。
3)用10倍柱體積以上的PBS洗滌,至流出液無蛋白檢出。
4)加入2倍柱體積0.1 M 檸檬酸(Citrate Acid, pH 2.7)封閉流出管,靜置5分鐘后收集穿出液,重復三次。測定 OD280估算抗體濃度,如果所得抗體較多可以使用SDS-PAGE檢測純度。也可以選擇0.1 M*(Glycine, pH 3.0)洗脫。
5)洗脫后的抗體立即加入2/5體積的1 M Tris,pH 9.0中和,使用Millipore蛋白濃縮管切換到所需緩沖液,或者透析,緩沖液通常為PBS含有0.02% NaN3以及1 mM EDTA。
6)濃縮到所需體積,加入50%甘油;測定效價后,分裝并保存在-20℃,避免凍結。
D型產氣莢膜梭菌抗體的特異性是指對相應抗原或近似抗原物質的識別能力。特異性高,抗體識別能力就強,通常以交*反應率來表示。交*反應率可用競爭抑制試驗測定。
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