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更新時間:2018-01-19 21:39:10瀏覽次數(shù):216次
聯(lián)系我時,請告知來自 智慧城市網(wǎng)人乳腺癌抗雌激素耐藥株LCC9細胞
是成體干細胞的一種我公司經(jīng)營細胞以及各類生化試劑、試劑盒、細胞、分子生物學、血清、抗體、標準品、培養(yǎng)基等品種齊全,價格實惠,質(zhì)量佳,如有需求請或在線客服!
人乳腺癌抗雌激素耐藥株LCC9細胞基本特性
細胞生長:貼壁生長
細胞形態(tài):上皮樣;多角形
細胞數(shù)量:1×106個細胞數(shù)
細胞傳代:1:2傳代
人乳腺癌抗雌激素耐藥株LCC9細胞的原位染色
(1)貼壁生長的對數(shù)期細胞鋪在24孔或6孔板中(內(nèi)有潔凈蓋玻片),讓其爬片生長,待長到50%~80%滿時,凋亡誘導劑處理細胞。
(2)將不同時間點處理的細胞進行免疫熒光染色,染色步驟同上。
(3)將染色的爬片細胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上,熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在細胞中的定位。
臨床病理切片的染色、檢測。
原代細胞的培養(yǎng)、檢測。
分析TFAR19蛋白在人體內(nèi)各組織器官的分布及定位
透射電子顯微鏡觀察
結(jié)果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu);Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。
DNA片斷化檢測
細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長的DNA大片段, 或180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。人乳腺癌抗雌激素耐藥株LCC9細胞經(jīng)處理后,采用常規(guī)方法分離提純DNA,進行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細胞群中可觀察到典型的DNA ladder。如果細胞量很少,還可在分離提純DNA后,用32P-ATP和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)使DNA標記,然后進行電泳和放射自顯影,觀察凋亡細胞中DNA ladder的形成。
大分子染色體DNA片段的測定
細胞凋亡的早期,染色體斷裂成為50~300kbp長的DNA大片段。所有超過一定分子量大小的雙鏈DNA分子在瓊脂糖凝膠中的遷移速度相同。線性DNA的雙螺旋半徑超過凝膠半徑時,即達到分辨力的極限。此時凝膠不再按分子量的大小來篩分DNA,DNA像通過彎管一樣,以其一端指向電場一極而通過凝膠,這種遷移模式稱之為"爬行"。因此,細胞凋亡早期產(chǎn)生的50~300kbp長的DNA大片段不能用普通的瓊脂糖凝膠電泳來分離。通常采用脈沖電泳技術(shù)可圓滿地解決這一問題。這個方法是在凝膠上外加正交的交變脈沖電場。每當電場方向改變后,大的DNA分子便滯流在爬行管中,直至新的電場軸向重新定向后,才能繼續(xù)向前移動。DNA分子量越大,這種重排所需要的時間就越長。當DNA分子變換方向的時間小于電脈沖周期時,DNA就可以按其分子量大小分開。
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