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上海滬震實業(yè)有限公司
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更新時間:2018-01-29 09:56:22瀏覽次數(shù):361次
聯(lián)系我時,請告知來自 智慧城市網(wǎng)裂殖壺菌
是成體干細胞的一種我公司經(jīng)營細胞以及各類生化試劑、試劑盒、細胞、分子生物學(xué)、血清、抗體、標準品、培養(yǎng)基等品種齊全,價格實惠,質(zhì)量佳,如有需求請或在線客服!
檢測原理裂殖壺菌
細胞發(fā)生凋亡或壞死,其細胞DNA均發(fā)生斷裂,細胞內(nèi)小分子量DNA斷增加,高分子DNA減少,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)DNA斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間,出現(xiàn)180-200bpDNA斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區(qū)別,細胞繁殖以分裂方式進行。細胞作為一個獨立生命單位,既有生長繁殖,也有衰老死亡。細胞衰老是生物有機體衰老的基礎(chǔ)。在多細胞生物的個體發(fā)育過程中,細胞常常分化成各種構(gòu)造和功能不同的細胞,如肌細胞、紅細胞和神經(jīng)細胞等都屬于高度分化的細胞。當細胞發(fā)生癌變時,細胞便喪失其原來正常的功能,并無休止地分裂,形成腫瘤。
裂殖壺菌操作方法
固定 | 培養(yǎng)細胞的制片或冰凍切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常規(guī)4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋之切片進行脫蠟、水化。 |
洗滌 | 玻片浸入PBS緩沖液,搖床上洗滌5min,三次。 |
反應(yīng) | 洗滌后的玻片用吸水紙吸干細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加反應(yīng)液(每50μL反應(yīng)液含TdT酶0.5μL,標記的-dUTP 1μL),使反應(yīng)液均勻地覆蓋于所有細胞或組織切片上,蓋上塑料蓋玻片,置濕盒中,37℃孵育1h。 |
終止反應(yīng) | 去掉塑料蓋玻片,將玻片置盛有洗滌緩沖液的染色缸內(nèi),洗滌兩次,每次5min。 |
FITC標記 | 洗滌后的玻片用吸水紙吸去細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加FITC反應(yīng)液(含FITC 2.5μg/mL),室溫下避光孵育10min。 |
洗滌 | 將玻片置于洗滌緩沖液內(nèi),洗兩次,每次5min。 |
PI復(fù)染 | 將玻片置于盛有PI染液的染色缸內(nèi),室溫下避光染色30min。 |
封片 | 用蓋玻片直接蓋在含PI染液的玻片上,亦可用無色指甲油涂于蓋玻片四周邊緣,置暗盒中,盡早鏡檢觀察。 |
交貨時間 | 15~20天 |
傳代:
1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當?shù)?(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。
4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
6.把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細胞都吹起來。
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