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更新時間:2018-02-02 02:19:41瀏覽次數(shù):343次
聯(lián)系我時,請告知來自 智慧城市網(wǎng)煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)
是一種能夠自動誘導由乳糖操縱子調控的目的蛋白質表達的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基有利于大腸桿菌的高水平生長,且無需監(jiān)測細胞生長狀態(tài)、無需加入誘導物(如IPTG)即可高水平自動誘導表達目的蛋白。現(xiàn)貨供應。咨詢!
基礎煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)
絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在*(BSS)基礎上,添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質。zui廣泛應用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,維生素的范圍亦很廣,另外常規(guī)含有無機鹽和代謝添加劑(例如核苷酸)。MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,形成神經(jīng)生物學zui通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM,現(xiàn)應用于快速生長的細胞,同MEM含有相同的營養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍。選擇某種培養(yǎng)基,應仔細了解成分表,應知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足。例如,有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有*,而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學領域,但它對某些對*敏感的可能有細胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言,則并非*選擇,特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質的環(huán)境中時。F12中含有*,據(jù)報道也有神經(jīng)毒效應。
煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB) 制備方法:
1. 培養(yǎng)同源細胞(未克隆前時的同一細胞)至半?yún)R合狀態(tài)時,更換一次培養(yǎng)液,再繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時后,吸出所有培養(yǎng)液。
2. 離心:3000~4000/分離心10分鐘,吸取上清液。
3. 濾過:再經(jīng)直徑0.22μm濾孔的濾膜過濾,低溫凍存貯備用;用時取1分適應培養(yǎng)基+2培養(yǎng)基混合使用。
生長因子絕大多數(shù)哺乳類胚胎神經(jīng)元有嚴格的營養(yǎng)要求,若不能提供適宜的生長因子或合適的因子組分,將會使絕大多數(shù)神經(jīng)元在體外培養(yǎng)的數(shù)天中死亡。解決這一問題有兩條思路,一是讓培養(yǎng)細胞提供自己的營養(yǎng)因子,二是在煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB) 中加入純的生長因子。如果細胞混合物能在高密度時生長,所需的生長因子便會積累到可觀的數(shù)值,尤其當培養(yǎng)基很少變化時。若某種細胞混合物生長時有很少的營養(yǎng)需求,可保持培養(yǎng)基在一段時間里不作任何變動,以使營養(yǎng)(生長)因子積累,而zui后促使所需要的細胞類型能夠生長。但是,這種對營養(yǎng)(生長)因子自身倚賴性亦有弊端,因為通常在混合細胞群體中細胞很難有同比例增殖,某些細胞會因生長條件的貧乏而受限制。另外,這種方法只能進行相當高密度的細胞培養(yǎng)。因為培養(yǎng)基的條件在細胞的較低密度時變的不夠有效。不過某些時候純化神經(jīng)元群體的低密度培養(yǎng)可用條件培養(yǎng)基(經(jīng)過了高密度培養(yǎng))進行,或在膠質上生長的神經(jīng)元所用過的培養(yǎng)基來支持。
滿足神經(jīng)元營養(yǎng)需求的第二條途徑是向培養(yǎng)基中加入生長因子。通常用于組培的通用適宜因子是神經(jīng)生長因子NGF。不過,只有少數(shù)對這種蛋白質有反應的細胞類型的細胞才能生長。
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