改良愛德華培養(yǎng)基基礎特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時，準備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細胞經上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新改良愛德華培養(yǎng)基基礎中。
4.48小時后，即可用于細胞克隆之用。
細胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標記下含有單個細胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內細胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過多，應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當細胞離開底物懸浮后，一并吸入管內，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細胞群后，即轉用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關產品如下：沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基
hz1075 緩沖蛋白胨水（BPW） 250g 用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng)，亦可用于李氏菌前增菌培養(yǎng)（GB，SN標準）
Buffered Peptone Water
hz1076 鹽*增菌液（SC） 250g 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)（GB，SN標準）
Selenite Cystine Broth
hz1077 鹽增菌液（SF） 250g 用于增殖標本中的沙門氏菌檢測
Selenite Enrichment Medium
hz1078 四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB） 250g 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)，需加入煌綠和碘液（GB，SN標準）
Tetrathionate Broth Base
hz1080 膽硫乳瓊脂（DHL） 250g 腸道菌選擇性培養(yǎng)基，特別是沙門氏菌的選擇性分離（GB，SN標準）
Deoybcholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar
hz1081 三糖鐵瓊脂（TSI） 250g 生化培養(yǎng)基，用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選（GB，SN標準）
Triple Sugar Iron Agar
hz1082 SS瓊脂 250g 用于沙門氏菌，志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標準）
Salmonella Shigella Agar
hz1083 亞硫酸鉍瓊脂（yb） 250g 用于沙門氏菌的選擇性分離（GB，SN標準）
Bismuth Sulfite Agar
hz1084 氯化鎂孔雀綠肉湯（MM，RVMedium） 250g 用于沙門氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)（GB標準）
Rappaport-Vassiliadis Mdeium
hz1085 HE瓊脂（HE） 250g 用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標準）
Hekton Enteric Agar
hz1086 尿素酶瓊脂基礎 250g 生化培養(yǎng)基，用于細菌脲酶檢測（GB，SN標準）
Urease Agar Base
hz1087 V-P半固體瓊脂 250g 生化培養(yǎng)基，用于細菌V-P試驗（SN標準）
Voges-Proskauer Semisolid Agar
hz1088 吲哚培養(yǎng)基 10g 生化培養(yǎng)基，用于細菌靛基質試驗，亦稱*肉湯（SN標準）
Indole Medium
hz1089 賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 10g 生化培養(yǎng)基，賴氨酸脫羧酶試驗（GB，SN標準）
Lysine-decarboyblase Test Broth
hz1090 硝酸鹽培養(yǎng)基基礎(無) 250g 生化培養(yǎng)基，用于細菌硝酸鹽還原試驗，KCN抑制（需另加入）試驗（GB，SN標準）
Nitrate(KCN) Broth Base(KCN-free)
hz1091 丙二酸鈉培養(yǎng)基 10g 生化培養(yǎng)基，用于細菌丙二酸鹽利用試驗（GB，SN標準）
Malonate Broth
hz1092 衛(wèi)矛醇半固體瓊脂 10g 生化培養(yǎng)基，用于細菌衛(wèi)矛醇發(fā)酵試驗（SN標準）
Dulcitol Semisolid Agar
hz1093 GN增菌液 250g 主要用于志賀氏菌的增菌培養(yǎng)，亦可用于沙門氏菌的增菌培養(yǎng)（GB標準）
Gram Negative Enrichment Broth
hz1094 木糖賴氨酸去氧膽酸鹽瓊脂（XLD） 250g 選擇性培養(yǎng)基，用于分離志賀氏菌屬，也可用于分離沙門氏菌屬
yblose Lysine Desoybcholate Medium
hz1095 志賀氏菌增菌肉湯 250g 用于志賀氏菌增菌培養(yǎng)
Shigella Broth
