氨芐*麥康凱瓊脂基礎特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時，準備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新氨芐*麥康凱瓊脂基礎中。
4.48小時后，即可用于細胞克隆之用。
細胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標記下含有單個細胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過多，應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當細胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關產(chǎn)品如下：hz0255 小鼠成纖維細胞系 McCoy細胞
hz0256 小鼠成纖維細胞,NIH-3T3細胞
hz0257 小鼠成纖維細胞,NCTC clone 929細胞
hz0258 小鼠成纖維細胞,L929細胞
hz0259 小鼠成纖維細胞,L929-EGFP-puro細胞
hz0260 小鼠成纖維細胞,C3H 10T1/2 2A6細胞
hz0261 小鼠成纖維細胞,3T3細胞
hz0262 小鼠成纖維細胞,3T3NIH細胞
hz0263 小鼠成肌細胞,C2C12細胞,
hz0264 小鼠成骨細胞系 MC3T3-E1細胞
hz0265 小鼠成骨細胞,2T3細胞,
hz0266 小鼠表皮細胞,JB6 Cl 30-7b細胞
hz0267 小鼠白血病細胞G-CSF依賴性 NFS-60細胞
hz0268 小鼠白血病細胞,P388細胞
hz0269 小鼠白血病細胞,M1細胞
hz0270 小鼠白血病細胞,L1210細胞,
hz0271 小鼠白血病細胞,C3細胞
hz0272 小鼠白血病克隆細胞系 L6565細胞,
hz0273 小鼠白血病 L1210細胞
hz0274 小鼠艾氏腹水瘤細胞,TCM15S180細胞
hz0275 小鼠艾氏腹水瘤細胞,ECA細胞,
hz0276 小鼠β胰島素瘤細胞,RIN-m5F細胞
hz0277 小鼠X小鼠 PK136細胞
hz0278 小鼠T淋巴細胞瘤細胞,Cyc-Tag(S49)細胞
hz0279 小鼠T淋巴細胞,Cl.Ly1+2-/9細胞
hz0280 小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞,SRSV/3T3細胞
hz0281 小鼠Mo-MuLv感染的3T3細胞,Mo-MuLV/3T3細胞
hz0282 小鼠Lewis肺癌細胞,LLC-RFP-puro細胞
hz0283 小鼠Lewis肺癌瘤株 LLT細胞
hz0284 小鼠L6565白血病克隆細胞系 L6565細胞
