馬鈴薯瓊脂特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新馬鈴薯瓊脂中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下：hz0798 人腦多形性膠質(zhì)瘤細(xì)胞,BT-325細(xì)胞
hz0799 人男性正常龜頭細(xì)胞系 HS68細(xì)胞
hz0800 人耐VCR胃腺癌細(xì)胞,SGC-7901/VCR細(xì)胞
hz0801 人膜間皮細(xì)胞,MeT-5A細(xì)胞
hz0802 人膜間皮細(xì)胞,CRL-9444細(xì)胞,
hz0803 人膜間皮細(xì)胞,CRL-9444 MeT-5A細(xì)胞
hz0804 人彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤B淋巴細(xì)胞,Pfeiffer細(xì)胞
hz0805 人盲腸腺癌細(xì)胞（未分化）Hce-8693細(xì)胞,
hz0806 人盲腸未分化癌 HCE-8962細(xì)胞,
hz0807 人慢性髓原白血病細(xì)胞,K562細(xì)胞,
hz0808 人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系 K562細(xì)胞
hz0809 人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞,HCPEpiC細(xì)胞
hz0810 人卵巢腺癌細(xì)胞
hz0811 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞,ES-2細(xì)胞
hz0812 人卵巢畸胎瘤細(xì)胞,PA-1細(xì)胞
hz0813 人卵巢癌*耐藥株 A2780/Taxol細(xì)胞
hz0814 人卵巢癌細(xì)胞株 OC3細(xì)胞,
hz0815 人卵巢癌細(xì)胞系 Anglne細(xì)胞
hz0816 人卵巢癌細(xì)胞系 3AO細(xì)胞
hz0817 人卵巢癌細(xì)胞（耐藥） SKOV3/DDP細(xì)胞
hz0818 人卵巢癌細(xì)胞,TOV-21G細(xì)胞,
hz0819 人卵巢癌細(xì)胞,TOV-112D細(xì)胞
hz0820 人卵巢癌細(xì)胞,SW626細(xì)胞
hz0821 人卵巢癌細(xì)胞,SK-OV-3細(xì)胞
hz0822 人卵巢癌細(xì)胞,OVTOKO細(xì)胞
hz0823 人卵巢癌細(xì)胞,OVISE細(xì)胞
hz0824 人卵巢癌細(xì)胞,OVCAR4細(xì)胞
hz0825 人卵巢癌細(xì)胞,OVCAR3細(xì)胞
hz0826 人卵巢癌細(xì)胞,Ovary細(xì)胞
hz0827 人卵巢癌細(xì)胞,OVAC細(xì)胞
hz0828 人卵巢癌細(xì)胞,OV90細(xì)胞
hz0829 人卵巢癌細(xì)胞,OV56細(xì)胞
hz0830 人卵巢癌細(xì)胞,KURAMOCHI細(xì)胞
hz0831 人卵巢癌細(xì)胞,KM202L細(xì)胞
hz0832 人卵巢癌細(xì)胞,IGROV1細(xì)胞
hz0833 人卵巢癌細(xì)胞,HOC1細(xì)胞
hz0834 人卵巢癌細(xì)胞,HO-8910細(xì)胞
hz0835 人卵巢癌細(xì)胞,EFO-27細(xì)胞
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