AN 厭氧瓊脂基礎(chǔ)特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以?xún)H覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動(dòng)、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個(gè)細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動(dòng)物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時(shí)制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時(shí)，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過(guò)夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時(shí)，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新AN 厭氧瓊脂基礎(chǔ)中。
4.48小時(shí)后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
AN 厭氧瓊脂基礎(chǔ)細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時(shí)首先需先用消化法制備出分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時(shí)要迅速準(zhǔn)確，爭(zhēng)取在zui短時(shí)間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時(shí)后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺(tái)上，觀察和標(biāo)記下含有單個(gè)細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無(wú)需換液，只有在細(xì)胞增長(zhǎng)過(guò)于緩慢時(shí)才可進(jìn)行換液。換液時(shí)先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過(guò)多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個(gè)時(shí)，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時(shí)后進(jìn)行觀察。挑選生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過(guò)多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時(shí)，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開(kāi)底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
AN 厭氧瓊脂基礎(chǔ)相關(guān)產(chǎn)品如下：hz1032 煌綠乳糖膽鹽肉湯 （BGLB） 250g 用于大腸菌群，大腸桿菌的測(cè)定（SN標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)DA標(biāo)準(zhǔn)）
Brilliant Green Lactose Bile Brogh
hz1033 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨MUG肉湯（LST-MUG） 100g 用于大腸桿菌（葡萄糖苷酶熒光）檢驗(yàn)及腸出血性大腸桿菌O157：H7鑒定（FDA ，SN標(biāo)準(zhǔn)）
Lauryl Sulfate Tryptose Broth with MUG
hz1034 EC 肉湯 250g 用于糞大腸菌群，大腸桿菌的測(cè)定（SN標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)DA標(biāo)準(zhǔn)）
E.Coli Broth
hz1035 EC -MUG肉湯 250g 用于糞大腸菌群，大腸桿菌的測(cè)定（SN標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)DA標(biāo)準(zhǔn)）
E.Coli MUG Broth
hz1036 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 250g 用于大腸菌群，糞大腸菌群，大腸桿菌的測(cè)定（GB標(biāo)準(zhǔn)）
Lactose Bile Broth
hz1037 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 250g 用于大腸菌群，糞大腸菌群，大腸桿菌的測(cè)定（GB標(biāo)準(zhǔn)）
Lactose Broth
hz1038 乳糖膽鹽培養(yǎng)基 250g 用于化妝品中糞大腸桿菌的檢驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
Lactose Bile Medium
hz1039 乳糖蛋白胨培養(yǎng)基 250g 用于飲用水，水源水中總大腸菌群的測(cè)定
Lactose Peptone Broth
hz1041 伊紅美藍(lán)瓊脂 (EMB) 250g 弱選擇性培養(yǎng)基，用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌
Eosin-Methylene Blue Agar
hz1042 亮綠瓊脂 250g 用于飲用水，水源水中沙門(mén)氏菌選擇性增菌
Brilliant Green Lactose Broth
hz1043 亮綠乳糖培養(yǎng)基 250g 用于飲用天然礦泉水中大腸桿菌的檢驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
Brilliant Green Lactose Medium
hz1044 品紅亞硫酸鈉瓊脂（遠(yuǎn)滕氏瓊脂） 250g 用于飲用水、水源水中總大腸菌群的選擇性分離和確證
hz1045 Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar
hz1045 去氧膽酸鹽瓊脂 250g 用于大腸桿菌固體平板測(cè)定，腸道菌選擇性分離
Desoybcholate Lactose Agar
hz1046 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂 (VRBA) 250g 用于大腸菌群的固體平板檢測(cè)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
Violet Red Bile Agar
hz1047 結(jié)晶紫中性紅膽鹽MUG瓊脂（VRBA-MUG） 250g 用于大腸菌群和大腸桿菌的固體平板檢測(cè)（BAM）
Violet Red Bile Agar with MUG
hz1048 MR-VP培養(yǎng)基 250g 用于大腸桿菌的甲基紅和VP試驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
Methyl Red Voges Proskauer Broth
hz1049 腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂 (VRBDA) 250g 用于腸道菌計(jì)數(shù)和腸桿菌科鑒別
Violet Red Bile Dextrose Agar
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