Hayflick 培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新Hayflick 培養(yǎng)基中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
Hayflick 培養(yǎng)基細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
Hayflick 培養(yǎng)基相關(guān)產(chǎn)品如下：hz-1132 SK-N-MC(神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞)
hz-1133 SK-N-MC(神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞)
hz-1134 BxPC-3(原位胰腺腺癌細(xì)胞)
hz-1135 BxPC-3(原位胰腺腺癌細(xì)胞)
hz-1136 KP-N-NS(腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移))
hz-1137 AsPC-1(轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞)
hz-1138 AsPC-1(轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞)
hz-1139 U-2 OS(骨肉瘤細(xì)胞)
hz-1140 U-2 OS(骨肉瘤細(xì)胞)
hz-1141 GBC-SD(膽囊癌細(xì)胞)
hz-1142 RD(惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞)
hz-1143 RD(惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞)
hz-1144 HCCC-9810(膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞)
hz-1145 A-673(橫紋肌瘤細(xì)胞)
hz-1146 SMMC-7721(肝癌細(xì)胞)
hz-1147 SMC-1(胸膜細(xì)胞瘤)
hz-1148 QGY-7703(肝癌細(xì)胞)
hz-1149 NCI-H446 [H446](小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)
hz-1150 QGY-7701(肝癌細(xì)胞)
hz-1151 BEL-7405(肝癌細(xì)胞)
hz-1152 NCI-H460 [H460](大細(xì)胞肺癌細(xì)胞0
hz-1153 NCI-H460 [H460](大細(xì)胞肺癌細(xì)胞0
hz-1154 BEL-7404(肝癌細(xì)胞)
hz-1155 BEL-7402(肝癌細(xì)胞)
hz-1156 QG-56(肺扁平上皮癌細(xì)胞)
hz-1157 SPC-A-1(肺腺癌細(xì)胞)
hz-1158 HGC-27(胃癌細(xì)胞（未分化）)
hz-1159 LTEP-a-2(肺腺癌細(xì)胞)
hz-1160 AGS(胃腺癌細(xì)胞)
hz-1161 MGC80-3(胃癌細(xì)胞)
hz-1162 95-D(高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞)
hz-1163 BGC-823(胃腺癌細(xì)胞（低分化）)
hz-1164 BT549(乳腺管癌細(xì)胞)
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