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上海滬震實業有限公司
光合細菌培養基Ⅰ
是一種能夠自動誘導由乳糖操縱子調控的目的蛋白質表達的培養基。該培養基有利于大腸桿菌的高水平生長,且無需監測細胞生長狀態、無需加入誘導物(如IPTG)即可高水平自動誘導表達目的蛋白。現貨供應。咨詢!
光合細菌培養基Ⅰ特殊培養法
二倍體細胞培養法與一般培養相同,關鍵在于傳代,其傳代程序為:
1.吸除舊培養液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化,加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可;作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大,便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養液(新舊培養液按2:1新舊混合)。
5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法:
1.取原代培養的人或動物胚胎成纖維細胞,90%匯合時制成細胞懸液,再按105細胞/毫升重新接種培養。
2.在細胞半匯合時,準備0.25μg/ml的絲裂霉素C,按2μg/106細胞的量加入到培養瓶中過夜;或用射線單次照射,劑量30~50戈瑞。
3.細胞經上述處理后,Hanks液漂洗兩次、更換培養液、再培養24小時,*消化細胞制成懸液,按5×104(104細胞/cm2)接種入新光合細菌培養基Ⅰ中。
4.48小時后,即可用于細胞克隆之用。
細胞分離(克隆)培養
多孔塑料培養板單細胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆細胞,吸出瓶內培養液,加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備:做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液,然后稀釋細胞,使之成為1~2細胞/毫升懸液,zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養液。
3.接種:先用吸管輕輕吹打細胞懸液,使混懸均勻,繼用加樣器向塑料培養板每孔內加0.5毫升。接種時要迅速準確,爭取在zui短時間內加完,以免培養液蒸發,然后迅速蓋好蓋板,置CO2溫箱培養。
4.標記:培養6~12小時后,待細胞下沉冰貼附于培養板孔底后,從溫箱中取出,置倒置光顯微鏡臺上,觀察和標記下含有單個細胞的孔,置CO2溫箱培養。在培養中一般無需換液,只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養基,但不要吸除過多,余少許,以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養液,繼續培養3~4周。待孔內細胞增至500~600個時,可進行分離培養。
5.分離擴大培養:培養86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔,先吸除舊培養液,用Hanks洗1~2次,繼加*少許,加入量已能覆蓋細胞群即可,如過多,應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視,待發現細胞變圓時,加入0.1ml含10%血清的克隆培養基,用吸管輕輕吹打,當細胞離開底物懸浮后,一并吸入管內,移入另瓶或皿中,再補加一定量克隆培養液,置CO2溫箱中繼續培養、增殖,使之形成新的細胞群后,即轉用常規培養法培養。
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