N6 培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新N6 培養(yǎng)基中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
N6 培養(yǎng)基細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
N6 培養(yǎng)基相關(guān)產(chǎn)品如下：hz1001 平板計數(shù)瓊脂（PCA） 250g 用于細(xì)菌總數(shù)的測定，該培養(yǎng)基含糖
Plate Count Agar
hz1002 營養(yǎng)瓊脂 (NA) 250g 營養(yǎng)瓊脂是 APHA 、 GB 標(biāo)準(zhǔn)、 SN 標(biāo)準(zhǔn)和國家藥典*的培養(yǎng)基，用于食品、奶制品及水中細(xì)菌總數(shù)的
Nutrient Agar
hz1003 營養(yǎng)肉湯 (NB) 250g 用于一般營養(yǎng)不苛求細(xì)菌的培養(yǎng)（SN，GB標(biāo)準(zhǔn)）
Nutrient Broth
hz1004 TTC營養(yǎng)瓊脂 250g 用于細(xì)菌總數(shù)測定
TTC Nutrient Agar
hz1005 錳鹽營養(yǎng)瓊脂 250g 用于嗜熱需氧芽孢桿菌的檢驗
Manganese Nutrient Agar
hz1006 血瓊脂基礎(chǔ) 250g 用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌培養(yǎng)及溶血試驗
Blood Agar Base
hz1007 胰化大豆瓊脂 250g 用于細(xì)菌總數(shù)測定
Nutrient Agar
hz1008 LB瓊脂 250g 用于細(xì)菌培養(yǎng)
LB Nutrient Agar
hz1009 LB肉湯 250g 用于細(xì)菌培養(yǎng)
LB Broth
hz1010 營養(yǎng)肉湯 (不含糖) 250g 用于一般營養(yǎng)不苛求細(xì)菌的培養(yǎng)
（Dextrose-Free）Nutrient Broth
hz1011 溴甲酚紫葡萄糖肉湯 250g 用于低酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
Bromcresol Purple Dextrose Brofh
hz1012 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基 250g 用于壓力蒸汽滅菌效果測定
BCP Dextrose Peptone Brofh
hz1013 0.5%* 250g 用于生物監(jiān)測評價
0.5%Dextrose Brofh
hz1014 胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA） Tryptic Soy Agar 250g 用于醫(yī)藥行業(yè)的衛(wèi)生監(jiān)測培養(yǎng)
Tryptic Soy Agar
hz1015 胰蛋白胨大豆肉湯（TSB） 250g 用于醫(yī)藥行業(yè)的衛(wèi)生監(jiān)測培養(yǎng)
Tryptic Soy Broth
hz1016 0.1%蛋白胨水 250g 用于樣品稀釋
0.1%Peptone W
hz1017 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FT） 250g 用于需氧菌厭氧菌和微需氧細(xì)菌的培養(yǎng)
Fluid Thioglycollate Medium
hz1018 SCDLP液體培養(yǎng)基 250g 用于化妝行業(yè)的衛(wèi)生檢測
Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth
hz1019 酸性肉湯培養(yǎng)基 250g 用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
