Kassanis 培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以?xún)H覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動(dòng)、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個(gè)細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動(dòng)物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時(shí)制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時(shí)，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過(guò)夜；或用射線(xiàn)單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時(shí)，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新Kassanis 培養(yǎng)基中。
4.48小時(shí)后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
Kassanis 培養(yǎng)基細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時(shí)首先需先用消化法制備出分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時(shí)要迅速準(zhǔn)確，爭(zhēng)取在zui短時(shí)間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時(shí)后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺(tái)上，觀察和標(biāo)記下含有單個(gè)細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無(wú)需換液，只有在細(xì)胞增長(zhǎng)過(guò)于緩慢時(shí)才可進(jìn)行換液。換液時(shí)先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過(guò)多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個(gè)時(shí)，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時(shí)后進(jìn)行觀察。挑選生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過(guò)多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時(shí)，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開(kāi)底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
Kassanis 培養(yǎng)基相關(guān)產(chǎn)品如下：hz0001 倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞 BHK-21 [C-13]
hz0002 倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 CHL
hz0003 倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 V79
hz0004 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CHO
hz0005 倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 R 1610
hz0006 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,二氫*還原酶缺陷 CHO/dhFr-
hz0007 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株 CHO-K1
hz0008 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 Lec1
hz0009 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CTLA4 Ig-24
hz0010 長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞 4179
hz0011 長(zhǎng)尾綠猴腎細(xì)胞 4647
hz0012 大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 A7r5
hz0013 大鼠成肌細(xì)胞 L6
hz0014 大鼠肺泡巨噬細(xì)胞 NR8383
hz0015 大鼠心肌細(xì)胞 H9c2(2-1)
hz0016 大鼠肝癌細(xì)胞 CBRH-7919
hz0017 大鼠肝癌細(xì)胞 RH-35
hz0018 大鼠肝細(xì)胞 BRL
hz0019 大鼠肝細(xì)胞 BRL 3A
hz0020 大鼠胰腺外分泌細(xì)胞 AR42J
hz0021 大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞 C6
hz0022 大鼠乳腺癌細(xì)胞 SHZ-88
hz0023 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化) PC-12
hz0024 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化) PC-12
hz0025 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化) PC-12
hz0026 大鼠腎細(xì)胞 NRK
hz0027 大鼠腎細(xì)胞 NRK-52E
hz0028 大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞 RBL-2H3
hz0029 大鼠雪旺細(xì)胞 RSC96
hz0030 貂肺上皮細(xì)胞 Mv.1.Lu
hz0031 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞 COS-1
hz0032 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞 COS-7
hz0033 非洲綠猴腎細(xì)胞 CV-1 [Part of the Wistar Special Collection]
hz0034 非洲綠猴腎細(xì)胞 Vero
hz0035 非洲綠猴腎細(xì)胞 VERO C1008 (E6)
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