可溶性淀粉特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同,關(guān)鍵在于傳代,其傳代程序為:
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化,加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可;作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大,便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液(新舊培養(yǎng)液按2:1新舊混合)。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法:
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞,90%匯合時制成細胞懸液,再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時,準備0.25μg/ml的絲裂霉素C,按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜;或用射線單次照射,劑量30~50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后,Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時,*消化細胞制成懸液,按5×104(104細胞/cm2)接種入新可溶性淀粉中。
4.48小時后,即可用于細胞克隆之用。
細胞分離(克隆)培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆細胞,吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液,加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備:做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液,然后稀釋細胞,使之成為1~2細胞/毫升懸液,zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種:先用吸管輕輕吹打細胞懸液,使混懸均勻,繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準確,爭取在zui短時間內(nèi)加完,以免培養(yǎng)液蒸發(fā),然后迅速蓋好蓋板,置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標記:培養(yǎng)6~12小時后,待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后,從溫箱中取出,置倒置光顯微鏡臺上,觀察和標記下含有單個細胞的孔,置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液,只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基,但不要吸除過多,余少許,以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時,可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng):培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔,先吸除舊培養(yǎng)液,用Hanks洗1~2次,繼加*少許,加入量已能覆蓋細胞群即可,如過多,應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視,待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時,加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打,當(dāng)細胞離開底物懸浮后,一并吸入管內(nèi),移入另瓶或皿中,再補加一定量克隆培養(yǎng)液,置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖,使之形成新的細胞群后,即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下:hz1597 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞,C6-RFP細胞
hz1598 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞,C6-EGFP-puro細胞
hz1599 大鼠腦間質(zhì)細胞,DI TNC1細胞
hz1600 大鼠卵巢癌細胞株 NUTU-19細胞
hz1601 大鼠巨噬細胞,MC細胞
hz1602 大鼠膠質(zhì)瘤細胞,C6細胞
hz1603 大鼠回腸細胞,IEC-18細胞,
hz1604 大鼠滑膜細胞
hz1605 大鼠骨髓瘤細胞IR983F細胞
hz1606 大鼠骨髓瘤細胞,Y3-Ag1.2.3細胞
hz1607 大鼠骨肉瘤細胞,UMR-106細胞,
hz1608 大鼠骨肉瘤 VMR106細胞
hz1609 大鼠骨骼肌成肌細胞,L6細胞
hz1610 大鼠肝星形細胞,HSC-T6細胞,
hz1611 大鼠肝星形細胞,CFSC-8B細胞
hz1612 大鼠肝星形細胞,CFSC-3H & 5H細胞
hz1613 大鼠肝星形細胞,CFSC-2G細胞
hz1614 大鼠肝細胞瘤細胞,H-4-Ⅱ-E細胞
hz1615 大鼠肝細胞瘤 H4-II-E-C3細胞
hz1616 大鼠肝細胞,IAR20細胞
hz1617 大鼠肝細胞,BRL細胞
hz1618 大鼠肝細胞,BRL大鼠Buffalo細胞
hz1619 大鼠肝細胞,BRL 3A細胞
hz1620 大鼠肝上皮樣干細胞,WB-F344細胞
hz1621 大鼠肝癌細胞(乳腺癌細胞接種到肝臟成瘤) Walker-256細胞
hz1622 大鼠肝癌細胞(wistar 大鼠) CBRH7919細胞
hz1623 大鼠肝癌細胞,Walker-256細胞,
hz1624 大鼠肝癌細胞,RH-35細胞
hz1625 大鼠肝癌細胞,H4-II-E-C3細胞
hz1626 大鼠肝癌細胞,H4-ⅡE細胞
hz1627 大鼠肝癌細胞,CRL-1548細胞
hz1628 大鼠肝癌細胞,CBRH-7919細胞