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如何找到ELISA配對抗體

閱讀：425發布時間：2016-5-16

    單克隆抗體制備時很多朋友會遇到這樣的問題，即我們免疫用的蛋白為原核表達蛋白而目的蛋白是真核蛋白或病毒等，因為沒有標準品我們做出來的抗體沒有辦法用標準品來驗證是否與其發生反應，zui終導致我們做出的是無用抗體。以下內容為我公司實驗室技術總結的幾種方法供大家參考，希望對大家有所幫助。
一、若要檢測的抗原為某種新的病毒
方法：1、大量做出該病毒某個蛋白的單克隆抗體；    
      2、大量采集該病毒疑似感染動物或人血液，用PCR的方法進一步確定每份血液是否真的有該病毒存在；  
      3、將你做出的大量抗體中的一個做標記作為標記抗體，其他所有抗體作為包被抗體，檢測第二步中確定陽性的血清，結果與陰性血清做對比，并畫出點狀分布圖。若陽性血清大部分的點在陰性血清之上恭喜你找到配對抗體了；若結果相差不大，請重新標記一株抗體做相同實驗。
二、若要檢測抗原為某一細胞因子
方法：1、通過超表達的方法建立穩定表達的細胞系，注意要在目的蛋白上加相應的標簽，以便純化。若僅僅是找到配對抗體則不需要純化甚至不需要建立穩定表達的細胞系瞬時轉染就可實現，若要進一步作出標準曲線請純化。
     2、 將細胞系建立后，我們就可以拿到標準品了，做配對工作就相應簡單。
     3、若該種細胞因子可有某種陽性刺激物大量刺激而來，也可不做細胞系。用陽性刺激物刺激，我們細胞刺激物的上清液來做標準品也可。


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