關于ELISA試劑盒的每一步都要注意才行。 ELISA試劑盒加樣時的防錯小經驗 （1）用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過標本的小孔看過去下面的字會變小，沒加的字正常，非常容易區分。 （2）可以利用液面反光與沒有加的孔加以區別 （3）在標本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產生小氣泡，也可以加以區分 3、棋盤試驗的操作方法： （1）將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下（或者從左到右）的順序包被。 （2）將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA試劑盒從左到右或者從上到下加入。 （3）二抗的稀釋倍數是一定的，然后顯色，讀值。 OD值的測定時，波長要根據顯色劑的不同而定，一般上大家都使用TMB顯色，450nm讀值。根據讀值得結果可以選定合適的抗原和抗體效價，這就是棋盤 實驗的目的，如果抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話就用一抗和二抗作棋盤試驗。
注意事項
1．ELISA試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，ELISA試劑盒以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
