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細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法

閱讀：361發(fā)布時(shí)間：2015-1-8

    細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是指在動(dòng)植物體外生長(zhǎng),并不再形成組織。培養(yǎng)物一般為細(xì)胞群,也可以是單個(gè)細(xì)胞,近年來(lái),其已經(jīng)成為很多生物制品的主要材料,并廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)病理研究,本文針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)存在的一些常見(jiàn)問(wèn)題進(jìn)行分析研究并提出相應(yīng)防控措施,現(xiàn)總結(jié)如下。

問(wèn)題1：培養(yǎng)液pH值變化太快

可能原因：

(1)CO2張力不對(duì)

(2)培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊

(3)NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足

(4)培養(yǎng)液中鹽濃度不正確

(5)細(xì)菌、酵母或真菌污染

建議解決方法：

(1)按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5%到10%。

(2)松開(kāi)瓶蓋1/4圈。

(3)改用不依賴(lài)CO2培養(yǎng)液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。

(4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液。

(5)丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

問(wèn)題2：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變

可能原因：

(1)洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養(yǎng)基成分沉淀下來(lái)

(2)冰凍保存培養(yǎng)液

建議解決方法：

(1)用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后滅菌。

(2)將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。

問(wèn)題3：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時(shí)pH發(fā)生變化

可能原因：

細(xì)菌或真菌污染

建議解決方法：

丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。



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