穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒說明書
1 使用目的：
本試劑盒用于蔬菜、水果、相應食物、水及中毒殘留物中除蟲菊酯(Pyrethrins)殘留的定
量檢測。
2 實驗原理
本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有除蟲菊酯(Pyrethrins)偶聯抗原，加入
除蟲菊酯(Pyrethrins)標準品或樣品，游離除蟲菊酯(Pyrethrins)與微孔條上預包被的擬除蟲菊
酯(Pyrethroids)偶聯抗原互相競爭抗除蟲菊酯(Pyrethrins)抗體酶標記物，用TMB底物顯色，
加入終止液后顏色由藍色變為黃色，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中
除蟲菊酯(Pyrethrins)含量成反比，通過標準曲線計算樣品中除蟲菊酯(Pyrethrins)的含量。
3 試劑盒組成
3.1 預包被的除蟲菊酯(Pyrethrins)偶聯抗原的可拆酶標板：1塊（12孔×8條）。
3.2除蟲菊酯(Pyrethrins)標準品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0ng/ml,
0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml。
3.3抗除蟲菊酯(Pyrethrins)抗體酶結合物：1瓶（6ml）。
3.4顯色液A：1瓶（6ml）。
3.5顯色液B：1瓶（6ml）。
3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7*：1瓶（10×, 6ml），用于樣品稀釋用。
3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9說明書一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 設備
4.1.1波長450nm酶標儀。
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當的濾紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5 貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒說明書
2
6.2 不要使用過期試劑盒。
6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
6.4 標準品中含有除蟲菊酯(Pyrethrins)，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響
實驗結果。
6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的*，否則會影響實驗結果
6.9 混合試劑時應避免起泡。
7 工作液準備
7.1 除蟲菊酯(Pyrethrins)標準品溶液：0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3 *：用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4 反應終止液：已備用
8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則
會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取25μl處理后的樣品，加入25μl*于反應孔中（樣本稀釋倍數為2）
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時。回溫至室
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結果的可重復性*程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預*行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，*進行雙孔檢測
9.2.2 取所需數量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗除蟲菊酯(Pyrethrins)抗體酶結合物
9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液
