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上海撫生實業有限公司
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閱讀:328發布時間:2015-3-27
包被的方式
將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結合到固
相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分
子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。ELISA這種物理吸附是非特異性
的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同
的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表
面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯結多發生在Fc段上,抗體結合點暴露
于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方
法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原
決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,
即先將針對該抗原的特異抗體作預包被,其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結
合在固相上的抗原遠離載體表面,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相
抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質較多的抗原也可采
用捕獲包被法(見2.2.4),試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。間接包
被的另一優點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體
上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包
被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉涀贤饩€照射
(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白
質,如聚賴氨酸、*等作預包被,也可提高核酸的結合力。也可用親和素*系
統作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入*化的DNA,這種包被方法均勻、
牢固,已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。
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