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培養細胞的凍存及復蘇

閱讀:167發布時間:2015-9-28

elisa試劑盒 細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
1.凍存細胞
(1)選對數增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。
(2)按常規方法把培養細胞制備成懸液,計數,使細胞密度達5×107/ml左右密度,離心,去上清。
(3)加入配制好的凍存液(培養液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上elisa試劑盒清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內水分在凍結前透出細胞外。
(4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。
(5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。
(6)凍存:在特殊的儀器或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促進冰晶形成。
操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。
2. 復蘇細胞
elisa試劑盒(1)從罐中取出凍存管。
(2)迅速放入36℃~37℃水浴,不時搖動,使其急速融化,30~60s內完成。
(3)凍存管用70%酒精擦拭消毒后,打開蓋子,用吸管將細胞懸液注入離心管中,再滴加10ml培養液。
(4)低速離心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培養液洗一次。
(5)用培養液適當稀釋后,裝入培養瓶37℃培養,次日更換一次培養液后,繼續培養。以后仍按常規進行培養。
凍存細胞數量要充分,密度應達到107/ml,在融后稀釋20倍時,仍能保持5×105/

Phospho-Lamin A + C(Ser22) 磷酸化核纖層蛋白A/C抗體
Phospho-Lck (Tyr505) 磷酸化淋巴細胞特異性蛋白*激酶抗體
Lyn 膜相關蛋白*激酶Lyn抗體
Phospho-Lyn (Tyr507) 磷酸化膜相關蛋白*激酶Lyn抗體
Phospho-Lyn (Tyr397) 磷酸化膜相關蛋白*激酶Lyn抗體
LRRC4 腦瘤相關基因抗體
LSAMP 大腦邊緣系統相關膜蛋白抗體
LRFN2 神經突觸粘附樣分子1抗體
LRFN4 富含*重復序列/Ⅲ型纖維連接蛋白4抗體
Laminin alpha 4 層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)
Laminin alpha 4 層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)
lipocalin 1 脂質運載蛋白1抗體
Lymphotactin 淋巴細胞趨化因子抗體
LRP5L 低密度脂蛋白受體5樣蛋白抗體
LRRTM3 富含*重復跨膜神經元蛋白3抗體
Lens culinaris agglutinin 扁豆凝集素


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