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如何驗證抗體的特異性?

閱讀:193發布時間:2015-10-30

現在,研究人員都意識到基礎研究的重復性存在問題。也許,一部分的責任在于抗體,這也推動了抗體的驗證工作。盡管用戶有責任驗證抗體,但商同樣有責任。研究人員介紹了一種驗證抗體的目標特異性的高通量方法。

  elisa試劑盒  雖說生物醫學研究的重復性不是太高,但如果說低于50%,你也許不相信。在蛋白質研究中,研究人員高度依賴于商業化的抗體。據統計,大約95%的抗體用戶依賴預先制備的抗體。遺憾的是,科學家并不信賴這些抗體,而的驗證通常被認為是“不夠,也不可靠的"。因此,他們在購買抗體時,不僅要花很多錢,也要花很多的時間來挑選。

    對于商而言,制備抗體并不是限速步驟。主要的限制在于證明它們能識別預定的目標,并確定它們的效價。為了制備出合格的試劑,商在高通量的制備之后必須加上高通量的驗證。

    為了實現這一點,研究人員利用一種的檢測來正確識別WB中的目的條帶,并驗證抗體特異性。這項檢測包括WB和免疫沉淀(IP)分析,使用了針對同一目標蛋白的不同表位的抗體。他們設計并合成了二到四個不同的肽段抗原,然后在兔子中制備了針對不同抗原的抗體,并進行純化。之后,他們開展了IP和WB分析。每個抗體被用在獨立的反應中,以便將陽性裂解液中內源表達的目標蛋白免疫沉淀。隨后在SDS-PAGE膠上分離免疫沉淀物并轉印。

    在抗體孵育過程中,他們使用了表位特異性的抗體。通過遠端表位抗體識別出的條帶被認為是預期的目的條帶。一旦目標條帶被確定,這些抗體將接受進一步的檢測,以評估它們在WB中的性能和特異性。這個抗體必須識別特定的目的條帶,并表現出zui小的交叉反應性,才算合格。

     elisa試劑盒   作者認為,用戶和供應商都有責任驗證抗體的特異性。在WB/IP的聯合分析中,利用針對不同表位的多個抗體來驗證特異性是一種有效的方法。


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