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細胞培養用液的分裝方法

閱讀:1283發布時間:2015-12-28

1)實驗器材的使用方法

    為防止消毒物品的再污染,實驗器材必須無菌操作:細胞用液瓶的打開、吸液、關閉等一切操作都要在超凈臺安全區進行。

(1)鹽水瓶瓶塞的使用

    上塞:瓶口消毒,右手拇指、食指塞進膠皮內,將塞旋入消毒瓶口內。瓶口再消毒,瓶直立火焰前方。雙手拇指、中指固定瓶位,雙手食指將膠皮外翻=zui后用消毒紙包裝。

    去塞:瓶口消毒后,用消毒鑷挑開膠皮。瓶口再消毒,膠塞旋松取出,瓶順風斜放45℃支架。

(2)*瓶瓶塞的使用

    用消毒的臺鑷取放瓶塞,注意瓶口火焰消毒。貯液瓶塞蓋好,封口膜或膠布密封。

(3)吸管的使用elisa試劑盒

    取管:右手松夾筒蓋,左手水平抖動管筒,管頭端暴露時取管,筒口消毒套蓋。吸管套吸頭后,火焰上方來回3次待用。

    注意:粗口徑吸管套前,吸頭先用濕酒精棉球沾濕;飯盒存放的吸管,使用時將盒蓋開一角,用火焰消毒的臺鑷將遮布掀起一角,吸管頭端暴露,臺鑷再火焰消毒,將吸管取出,遮布復原,盒蓋好。

(4)注射器的使用

    安裝:針栓、針筒消毒后在安全區套好。臺鑷消毒將針頭固定,字面在上。針頭放人消毒管內待用。

    使用:瓶口消毒去塞,直立火焰前方,針頭插入液面下,左手拿針筒,右手提針栓,緩慢吸出液體。排氣和多余液體推入酒精棉球內。

(5)瓶管、蓋的使用

    蓋的使用要求同塞。需使用同一蓋時,蓋使用面放在酒精棉球上。套蓋前,蓋使用面火焰消毒。

2)無菌濾液分裝

①使用正壓濾器時,采用邊過濾邊分裝的方法。瓶口的液滴先用微濕酒精棉球吸液,再用干酒精棉球由里向外擦拭,zui后,火焰消毒,加塞包裝。

②使用負壓濾器時,借助消毒吸管,將液體移入分裝瓶內,瓶口液滴擦拭方法同①。

③血清、酶液少量無菌液體用吸管分裝,分裝時注意多換吸管。

3)細胞用液的分裝要求

①根據配量準備分裝瓶和塞。分裝瓶規格、數量應根據實驗需要準備,這與每次、每周實驗用量、試劑穩定性等有關。避免包裝瓶過大、貯液時間過長或細胞用液反復凍融使用,造成營養成分損失和微生物污染。按一周用量挑選小包裝瓶。融化后的液體置4℃保存。

②實驗前,做好無菌室、超凈臺的清潔、消毒工作。實驗用品清點人臺,超凈臺啟動,紫外線消毒40 min。實驗試劑恢復室溫后,瓶口、瓶外壁酒精消毒入臺。臺面酒精消毒,點火,臺鑷消毒入酒精瓶。這樣做好了實驗準備。

③分裝前,做好各瓶貯液量標記,瓶液量要小于瓶容積的2/3。牛血清等融化后搖勻。方法是:左手掌心托瓶,右手拿瓶口順時針方向輕輕轉動液體,避免用力過猛而使液體沾染瓶口和塞。

④抽濾分裝時,盡量減少無菌室開門次數和非操作人員進入。嚴格無菌操作,盡量縮短試劑在空氣中暴露的時間。elisa試劑盒

⑤比較各分裝瓶液體的顏色:將液體顏色過淺的瓶棄去,此現象與瓶泡酸后沖洗不凈有關(瓶內殘留酸性物質)。分裝多瓶時,zui后幾瓶可能出現顏色加深的現象,這是因為瓶口敞開時間過長,液體CO2逃逸,pH值上升的緣故。顏色過深的液體用醋酸調節后使用。

⑥各試劑瓶標記名稱、濃度、配制日期、組號。細胞

⑦抽樣(開始、中間、zui后瓶)做無菌試驗,37℃培養3 d。


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