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細(xì)胞系凍存程序：
1) 單層細(xì)胞的消化。將經(jīng)24~48小時(shí)培養(yǎng)已長(zhǎng)成單層的傳代細(xì)胞培養(yǎng)物棄去生長(zhǎng)液，加適量ATV，1~2分鐘后倒棄ATV，再加入少量ATV液，經(jīng)0.5～1分鐘倒去ATV，室溫或37oC溫箱作用2~3分鐘，視細(xì)胞解離情況，拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶。使單層細(xì)胞*解離。SP2/0瘤細(xì)胞，待生長(zhǎng)好后用吸管吹打，再經(jīng)1 000轉(zhuǎn)/ 分離心lO分鐘。
2) 離心洗滌：向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加5~1 0m1預(yù)冷的MEM使細(xì)胞懸浮，再將其吸出置滅菌離心管中，以1 000rpm 離心8～10分鐘后棄去上清液。
3) 細(xì)胞懸液的制備：向離心管內(nèi)逐滴緩慢加入預(yù)冷的凍存保護(hù)液，使細(xì)胞濃度為150~400萬(wàn)/ml，然后迅速分裝于安瓿瓶中，每瓶加量為lml。