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小鼠角膜上皮細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

蘇云金芽胞桿菌加拿大亞種 Bacillus thuringiensis subsp. canadensis

蘇云金芽胞桿菌科爾默亞種 Bacillus thuringiensis subsp. colmeri

蘇云金芽胞桿菌達爾可他亞種 Bacillus thuringiensis subsp. dakota

蘇云金芽胞桿菌達姆斯塔特亞種 Bacillus thuringiensis subsp. darmstadiensis

蘇云金芽胞桿菌松蜀亞種 Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

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