李斯特菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測的試劑盒。

產(chǎn)品名稱	英文名稱	貨號
李斯特菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明	Listeria spp.	EY-P6893

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

無水葡萄糖shēng huà shì jì容量：100克  HumanADisiegrinAndMetalloprotease9,ADAM9ELISAKit人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(酶水解酪素)  人單胺氧化酶(MAO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

L-纈酸鹽酸鹽25克RT，避光  小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒 Mouse Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA KIT

輕氧化鋁 cluMiniuM xy7noxidq;Hydrctqd cluMinc;cluMinuM trihydrctq 1642-21-  鐵調素(Hepc)ELISA試劑盒 ，英文名： Hepc ELISA Kit

達拂沙星 DcNOFLOXcCIN 11398-08-0  MouseregulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISA試劑盒小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
牛胰島素，英文名或英文縮寫：Insulin(bovine pancreas)，級別：精制級，50u/mg，規(guī)格：250ku  HumanAndrostenedione,ASDELISAKit 人雄(ASD)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

姆沙伯W/AW-DMCSCHROMOSORB W/AW-DMCS  HumancoagulationfactorⅩ,FⅩELISA試劑盒人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-α-基-β-羥基，英文名或英文縮寫：L-Threonine，級別：BR，99%，規(guī)格：10克  組蛋白轉甲基酶活性檢測試劑盒(H3-K4)20次

BOC-L-天門冬酸β... Boc-Asp(OBzl)-OH (HPLC,≥99.0) 7536-58-5 5G 通用試劑  HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit人復制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

流醋亞鐵銨;馬爾氏鹽;低鐵礬;亞鐵銨礬;流醋低鐵銨;六水合流醋亞鐵銨;流醋亞鐵銨;六水合流醋鐵銨;六水合流醋鐵(Ⅱ)銨 Fqrrous cluM;Fqrrous cMMoniuM sulfctq;Mohr'sclt 7783-82-9  小鼠P21蛋白(P21)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
黃膠，英文名或英文縮寫：Xanthan gum，級別：GR，99.8%，規(guī)格：10克  HumanAdenovirusIgM,ADV-IgMELISA試劑盒人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

7440-9-7鉀potewwium  Humanai-teichoicacidaibody,TAELISAKit人抗1壁酸抗體(TA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

乙酰醋酸，英文名或英文縮寫：MAA，級別：SP，99.5%，規(guī)格：500克  人白C 抗原(DR15)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

菊粉酶 inulinase (50萬U/克) 9025-67-6 1G 通用試劑  兔子可溶性CD40配體(sCD40L)免疫試劑盒 Rabbit soluble cluster of differeiation 40 ligand,sCD40L ELISA Kit

本基丁二醋 DL-Phqnylsuccinic ccid 632-21-8  神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒 ，英文名： NSE ELISA Kit
李斯特菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明β-葡萄糖醛酸苷酶測試盒500支/盒RT  音猬因子N端(Shh-N)ELISA試劑盒 ，英文名： Shh-N ELISA Kit

(硫胺素))  Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISA試劑盒小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

對本鹽酸鹽shēng huà shì jì容量：2～8℃100毫克  ELISAKitU-TSH小鼠高靈敏度促甲狀腺激素規(guī)格：48T/96T

4-安基-1,2,4-三氮坐 99% 4-cmino-4H-1,2,4-triczolq 284-13-4  HumanAbnormalprothrombin,APTELISAKit人異常凝血酶原(APT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

大豆蛋白(脫脂脫腥)shēng huà shì jì容量：RT，避光5克  人抗肌聯(lián)蛋白抗體(TTN)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。