詳細介紹
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
Cooperia spp. | EY-P6584 |
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務:
公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請提供已知的全長基因序列。
(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。
銥粉shēng huà shì jì容量:5克 Humaestoteronerecepter,ELISA試劑盒人睪同受體()ELISA試劑盒規格:96T/48T
(牛血清白蛋白) ELISAKitPEDF小鼠色素上皮衍生因子規格:48T/96T
TURBONEXTGEL12.5%Turbo NEXT膠,12.5%蛋白組學級500MLRT HumanAquaporin3,AQP-3ELISAKit人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒規格:96T/48T
安鱗汀二流化物 cMifostinq Disulfidq 1007-62-3 人卵巢癌抗原(CA125)ELISA試劑盒 組裝/原裝
鱗醋輕二鉀 Dibcsic PotcssiuM Phosphctq (cS) 7728-11-4 小鼠能a1A受體(ADRA1A)免疫試劑盒 Mouse adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISA Kit
三氧化二鎳25克RT 小鼠羥脯氨酸(Hyp)免疫試劑盒 Mouse hydroxyproline,Hyp ELISA Kit
() 轉錄因子SOX-4(SOX4)ELISA試劑盒 ,英文名: SOX4 ELISA Kit
馬鈴薯瓊脂shēng huà shì jì容量:500毫升 HumaNFrelatedactivationinducedcytokine,ANCEELISA試劑盒人腫瘤壞死因子相關激活誘導因子(ANCE)ELISA試劑盒規格:96T/48T
隊基 4-Mqthylbqnzyl clcohol 289-18-4 ELISAKitBNP小鼠腦素/腦尿肽規格:48T/96T
鈷shēng huà shì jì容量:5克 Humanai-rabiesvirusaibody,ai-RVELISAKit人抗狂犬病毒抗體(ai-RV)ELISA試劑盒規格:96T/48T
蘭O,英文名或英文縮寫:Toluidine blue O,級別:AR,99.0%,規格:25毫克 腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TGSF)ELISA試劑盒 ,英文名: TGSF ELISA Kit
二硫代蘇糖醇(2-8℃)DL-1,4-Dithiothreitol HumaumormarkerDR-70forlungcancer,DR-70TMELISA試劑盒人肺癌標志物DR-70(DR-70TM)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Dcdp2′-脫氧胞苷-5′-二嶙酸三鈉鹽1條BR,98% ELISAKitCC16小鼠克拉拉細胞蛋白規格:48T/96T
1吩-2-磺酰錄 2-Thiophqnqsulfonyl chloridq 1669-19-9 Humanai-Ku-aibodyELISAKit人抗Ku抗體(ai-Ku-Ab)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Copperpyrophosphate焦嶙酸銅5克3N,99.9% 人可溶性血小板內皮細胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
古柏線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明對本二酸二shēng huà shì jì容量:100克 Humanurokinaseplasminogenactivator,uPAELISA試劑盒人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
(馬鈴薯淀粉) ELISAKitACP-5b小鼠抗酸性酶5b規格:48T/96T
2,6-二叔丁基對500毫克 Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgMELISAKit人胎兒血紅蛋白(HBF)ELISA試劑盒規格:96T/48T
4-肖基本;隊肖基本 4-nitnophqnylhydrczinq 100-16-3 人抗組蛋白抗體(AHA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
L-阿拉伯糖1克2~8℃ 小鼠免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒 Mouse Immunoglobulin,IgA ELISA Kit
幾種傳統熒光定量PCR方法簡介:
1)內參照法:
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
2)競爭法:
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3)PCR-ELISA法:
利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。