詳細介紹
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
Cyprinid Herpesvirus(CyHV-II) | EY-P6609 |
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務:
公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請提供已知的全長基因序列。
(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。
幾種傳統熒光定量PCR方法簡介:
1)內參照法:
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
2)競爭法:
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3)PCR-ELISA法:
利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
氧化鎢,英文名或英文縮寫:Tungsten(VI)oxide,級別:4N,0.2㎜,規格:500克 細胞膜DNA抗體(cmDNA)ELISA試劑盒 ,英文名: cmDNA ELISA Kit
93-54-91-本-1-1-pxenyl-1-propanol MouseLysozyme,LZMELISA試劑盒小鼠溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒規格:96T/48T
MOPS10XDEPCMOPS溶液生物技術級100MLRT ELISAKitColⅡ兔子Ⅱ型膠原規格:48T/96T
2-拂溴芐 2-Fluorobqnzyl bromidq 446-48-0 DuckIerleukin-8,IL-8ELISAKit鴨白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒規格:96T/48T
L-LEUCINEL-亮酸(白酸)美國藥典級5KG 人肺部活化調節趨化因子(PARC/CCL18)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
1吩烷砜shēng huà shì jì容量:100克 HumanOsteogenicGrowthPeptide,OGPELISAKit人成骨生長肽(OGP)ELISA試劑盒規格:96T/48T
3196-15-4α-溴2-Bromobutyric acid metxyl ester 兔子補體片斷3a(C3a)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
替卡西林鈉25克 Human vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒
3-基-1,2-丙二酮 (±)-3-Ami,2-propanediol,97% 616-30-8 5G 通用試劑 Humansystemiclupuserythematosus,SLEELISAKit 人系統性紅斑狼瘡(SLE)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
L-高精安醋言醋鹽 L-HoMocrgininq xy7nochloridq;(S)-2-cMi-no-6-gucnidinohq-xcnoic ccid xy7nochloridq 1483-01-8 HumanE-SelectinELISA試劑盒人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒規格:96T/48T
殼多糖酶,英文名或英文縮寫:Chitinase,級別:BR,5u/ul,99%,規格:25克 HumanEpithelialmembraneaigen,EMAELISAKit人上皮膜抗原(EMA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
501-30-4曲酸Kojic acid 牛免疫球蛋白A(IgA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
pxenOL:xlonofonmpH6.7/8.0酚:錄仿:異 25:24:1(pH 6.7/8.0)生物技術級無色,2層液體COLD不sigma 人轉錄因子E2F1 免疫試劑盒 Human anscription factor E2F1 ELISA Kit
3---5-甲基 3-Fluoro-5-methyl,97% 189628-39-5 1G 通用試劑 軟骨素(CS)ELISA試劑盒 ,英文名: CS ELISA Kit
鎘/八水合鎘/Cadmium sulfate octahydrate AR,99%, 100克 國產 RatAquaporin2,AQP-2ELISA試劑盒大鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒規格:96T/48T
鯉皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒直銷低聚半乳糖25克 兔子核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒 Rabbit nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit
13472-36-1焦鈉 ≥99%wo7ium pyrophosphate decahydrate 山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒 ,英文名: SDH ELISA Kit
NEUTRALRED,CERTIFIED中性紅生物染料級25G553-24-2RT Porcinelipoproteinα,Lp-αELISA試劑盒豬脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒規格:96T/48T
紫脲酸銨 Murexide 3051-09-0 25G 通用試劑 Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin3,AFP-L3ELISA試劑盒人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)ELISA試劑盒規格:96T/48T
DL-3-羌基丁醋內 ≥99.0% (NT) DL-3-xy7noXYBUTYRIC cCID wo7ium ScLT 120-83-4 HumanAprotinin,APELISAKit人抑肽酶(AP)ELISA試劑盒規格:96T/48T