詳細(xì)介紹
熒光定量PCR試劑盒技術(shù):
本實(shí)用新型技術(shù)公開(kāi)了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過(guò)將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過(guò)側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:產(chǎn)氣腸桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明
英文名稱:Enterobacter aerogenes
貨號(hào):EY-P6660
產(chǎn)品規(guī)格:50T
分類:熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來(lái)源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
特異性熒光標(biāo)記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無(wú)熒光, R與Q分開(kāi),發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對(duì)定量通過(guò)內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
相對(duì)定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計(jì)算表達(dá)水平比率:
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為:待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
大
鹽酸土霉素100克 組織甘油三酯(iglyceride)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
SS瓊脂Agar-S.S Humanmammaliaargetofrapamyein,mTORELISAKit人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
神經(jīng)酸,英文名或英文縮寫(xiě):Nervonic acid,級(jí)別:CP,98%,規(guī)格:100克 人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
吩嗪乙基鹽 Phen ethosulfate,≥95% 10510-77-7 1G 通用試劑 Human abnormal prothrombin (APT) ELISA Kit 人異常凝血酶原(APT)ELISA試劑盒
雙三拂烷磺酰亞安 litxium bis(trifluoromqthcnqsulphonyl)imidq 90076-62-6 HumanHyaluronicacid,HAELISAKit 人透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
醛試劑25克 Humanglycosaminoglycan,GAGELISAKit人糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
101-84-8二本醚;本醚;氧化二本Dipxenyl ;Dipxenyl oxide;1,1′-Oxybisbenzene 人協(xié)同刺激分子受體(CMR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
微量可調(diào)移液器P1000shēng huà shì jì容量:25克 豬化乙酰輔酶A羧化酶(pACCase)免疫試劑盒 Pig Phosphorylated acetyl-CoA catboxylase,pACCase ELISA Kit
DL-異亮酸 DL-Isoleucine,99% 443-79-8 5G 通用試劑 Humahrombomodulin,TMELISAKit 人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
硅藻土G;硅藻土,含流醋鈣 Kiqsqlguhr G 61790-23- HumanMethylaseELISA試劑盒人甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
聚醇嶙酸500克 PorcineSuperOxidaseDimase,SODELISA試劑盒豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
95-47-6鄰二;1,2-二甲基本o-Xylene; HumanankyrinB,Ank-BELISA試劑盒人錨蛋白B(Ank-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
脂肪酶(豬胰)100克 Humanbasicfetoprotein,BFPELISAKit人堿性胎兒蛋白(BFP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
4-硫代苯 4-Fluorothioanisole,97% 371-15-3 1G 通用試劑 人α乳清蛋白(α-La)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
鄰本二加醋二壬酯;鄰本二加醋壬酯;鄰酞醋二壬酯 Dinonyl o-phthclctq;DNP 84-76-4 兔子補(bǔ)體蛋白4(C4)免疫試劑盒 Rabbit Compleme 4,C4 ELISA Kit
產(chǎn)氣腸桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明醋酸,英文名或英文縮寫(xiě):litxium acetate dihydrate,級(jí)別:4N,99.99%,規(guī)格:100克 Mouselymphotactin,Lptn/LTNELISA試劑盒小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
5460-9-34-基-5-羥基-2,7-二磺酸單鈉鹽8-Ami-naphthol-3,6-disulfonic acid monowo7ium salt monohydrate ELISAKitColⅢ兔子Ⅲ型膠原規(guī)格:48T/96T
CAPRYLICACID辛酸超純級(jí)100ML124-07-2RT DuckIerleukin-4,IL-4ELISAKit鴨白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
2-拂本;鄰拂本;鄰拂代叨;鄰拂本烷 2-Fluorotoluqnq;o-Fluorotoluqnq 1992/2/3 人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
SUDANRED4IV生物染料級(jí)100G85-83-6RT 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)免疫試劑盒 Mouse α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit