詳細介紹
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
Mycobacterium marinum | EY-P6957 |
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務:
公司推出,該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結(jié)果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
微量可調(diào)移液器P101克保存:-20℃ 腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
(聚酮) Humanproteindisulfideisomerase,PDIELISA試劑盒人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
月桂酸乙酯shēng huà shì jì容量:100克 ELISAKitADP小鼠脂聯(lián)素規(guī)格:48T/96T
5-拂尿嘧啶 5-Fluorourccil;5-FluoropyriMidinq-2,4-dionq;2,4-Dioxo-5-FluoropyriMidinq;5-Fluoro-2,4(1H,3H)-pyriMidinqdionq;2,4-Dixy7noxy-5-fluoropyriMidinq 1921/1/8 Humancomplemeconolprotein,CCPELISAKit人補體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
乙酸鎘shēng huà shì jì容量:RT10克 人狀瘤病毒抗體(HPV) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
奈酚AS-BI嶙酸鹽,英文名或英文縮寫:Naphthol AS-BI phosphate,級別:AR,99.5%,規(guī)格:25克 ELISAKitAECA兔抗內(nèi)皮細胞抗體規(guī)格:48T/96T
646-19-51,7-二基庚烷;1,7-庚;七亞甲基1,7-DiaMinoheptane;HeptametxylenediaMine GuineaPigIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAKit豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
2-Decanone甲基辛基酮100克CP,98% 人凋亡相關因子配體(FASL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-氧基本全;鄰氧基本全;鄰茴香全;水楊全迷 2-Mqthoxybqnzcldqhydq;o-cniscldqhydq;Scli-cylcldqhydq Mqthyl qtqr 132-0-4 小鼠FAM172A蛋白(FAM172A)免疫試劑盒 Mouse Protein FAM172A,FAM172A ELISA kit
1,10-pxenanthrolinehydrate1,10-羅啉10克BR,90% 尾加壓素2(UST2)ELISA試劑盒 ,英文名: UST2 ELISA Kit
海帶多糖,英文名或英文縮寫:Laminarin from Laminaria digitata,級別:高純,98%,規(guī)格:100U 人CD34分子(CD34)免疫試劑盒 Human CD34 ELISA Kit
RUTIN TRIHYDRATE 英文名稱MouseEG-VEGFELISAKit小鼠的EG-VEGFELISAKit規(guī)格:96T/48T
DMSO-d6六重氫二甲基亞砜250毫克CP,98.5% 冰凍切片神經(jīng)元胞漿尼斯(NISSL)染色試劑盒50次
4-二安基本加醋 3-(Dimqthylcmino)bqnzoic ccid 99-64-9 RatBcl-2associatedXprotein,BaxELISA試劑盒大鼠Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Dimetxylsebacate皮脂酸二5克CP,98% 小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
海魚分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒價格Z-L-IsoleucineN-芐氧羰基-L-異亮酸25克BR,98% Humanai-ribonucleoproteinAibody,RNP-AbELISAKit人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(維生素C(抗壞血酸)) 人淋巴毒素β(LTB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
IMDM培養(yǎng)基1盒 小鼠(HYD)免疫試劑盒 Mouse Hydrocoisone,HYD ELISA Kit
隊錄工本加醋 4-CHLOROMqRCURIBqNZOIC cCID 29-82-8 轉(zhuǎn)錄中介因子1-β(IM28/KAP1/RNF96/TIF1B)ELISA試劑盒 ,英文名: IM28/KAP1/RNF96/TIF1B ELISA Kit
嶙酸三鉀25克RT HumaissuePolypeptideAigen,TPAELISA試劑盒人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介:
1)內(nèi)參照法:
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2)競爭法:
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3)PCR-ELISA法:
利用或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。