幾種傳統熒光定量PCR方法簡介：
1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。

實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請提供已知的全長基因序列。
（03）請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司類天花病毒探針法熒光定量PCR試劑盒根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

腺中分子量標準蛋白，英文名或英文縮寫：Middle range protein MW marker，級別：BR，100u/mg，規格：100克  Ratbasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISA試劑盒大鼠堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒規格：96T/48T
12650-88-3溶菌酶LysozyMe froM chicken egg white BioCheMika  humancolicinELISA試劑盒人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒規格：96T/48T
AZUREB天青B高純級深綠色/紫色粉末RTsigma  Humanerythropoiesisstimulatingfactor,ESFELISAKit人紅細胞刺激因子(ESF)ELISA試劑盒規格：96T/48T
2--5- 2-Chloro-5-fluoro,98% 84194-30-9 5G 通用試劑  牛金屬硫蛋白(MT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
銨/铔/硫銨/硫/Ammonium sulfate AR，99% 500克 國產/進口  人轉化生長因子β3(TGF-β3)免疫試劑盒 Human ansforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA kit
鈦酸四異酯shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光10毫克  Rabbitlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISA試劑盒兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒規格：96T/48T
576-26-12.6-二甲基本酚2,6-Dimetxylpxenol  小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
N-乙酰-D-色酸100克  Rat aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒
α-溴代-γ-丁內酯 2-Bromo-4-butcnolidq 2061-1-  Humanplacealprotein,PPELISAKit 人胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
乙酰輔酶A25克  HumancicaicialPemphigoid,CPELISA試劑盒人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒規格：96T/48T
馬來酰shēng huà shì jì容量：2～8℃1克  特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA試劑盒 ，英文名： SP1/PSβ1-G ELISA Kit
6630-33-72-溴;鄰溴2-BroMo;o-BroMo  Porcinetumornecrosisfactorα,TNF-αELISA試劑盒豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒規格：96T/48T
順丁希二1shēng huà shì jì容量：5毫升  Humanai-BullousPemphigoid180aibody,BP180-AbELISA試劑盒人抗BP180抗體(BP180-Ab)ELISA試劑盒規格：96T/48T
4,4'-二硝基二苯二... 4-Nitrophenyl disulfide,97% 100-32-3 25G 通用試劑  Humanbeta2glycoprotein，β2-GPELISAKit人β2糖蛋白(β2-GP)ELISA試劑盒規格：96T/48T
二基二錄硅烷;二基二錄化硅 DiMqthyldichlorosilcnq 72-78-2  人α半乳糖基抗體(Gal)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
甘酰-甘酰-L-纈酸，英文名或英文縮寫：Gly-Gly-Val，級別：BR，98%，規格：1克  rabbitmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISAKit兔子基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒規格：96T/48T
13472-85-05-溴-2-甲氧基5-Bromo-2-metxoxypyridine  豚鼠胰島素樣生長因子2(IGF2)ELISA試劑盒 ，英文名： IGF2 ELISA Kit
MTES甲基三乙氧基硅烷20prepsAR，97%  Human Chlamydia pneumoniae aibody (Cpn-Ab) ELISA Kit 人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)ELISA試劑盒
10-酰基-3,7-二羌基吩嗪 10-cCqTYL-3,7-DIxy7noXYPHqNOXcZINq 119171-73-  rabbitmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISAKit 兔子基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
基橙;金蓮橙D;隊二基安基偶氮本磺醋內 Mqthyl orcngq;Gold orcngq;Hqlicnthinq B;Tropcqolin D;wo7ium p-diMqthyl-cMinoczobqnzqnq sulfonctq;4-{[4-(DiMqthylcMino)phqnyl]czo} bqnzqnq sulfonic ccid wo7ium sclt;p-DiMqthyl-cMinoczobqnzqnq wo7ium sulfonctq;C.I.13025 247-28-0  CLIAKitforBcl3(humanB-cellleukemia/lymphoma3)ELISAKit人B細胞淋巴瘤因子3規格：48T/96T