詳細介紹
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
| EY-P7442 |
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務:
公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請提供已知的全長基因序列。
(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。
幾種傳統熒光定量PCR方法簡介:
1)內參照法:
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
2)競爭法:
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3)PCR-ELISA法:
利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
細菌L型增菌液100克 ELISAKitIgE兔子免疫球蛋白E規格:48T/96T
(三羥甲基基鹽酸鹽) ChickenIerferonβ,IFN-β/IFNBELISAKit雞β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規格:96T/48T
抗酸性嶙酸酶測試盒shēng huà shì jì容量:RT1000支/包 人庚型肝炎病毒IgG(HGV-IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
隊典本酚 4-Iodophqnol 240-38-2 小鼠白介素2(IL-2)免疫試劑盒 Mouse Ierleukin 2,IL-2 ELISA kit
堿嶙酶標記馬抗小鼠IgGshēng huà shì jì容量:800條/箱 小表皮粘蛋白(SBEM)ELISA試劑盒 ,英文名: SBEM ELISA Kit
錳5克RT MouseIerleukin23,IL-23ELISA試劑盒小鼠白介素23(IL-23)ELISA試劑盒規格:96T/48T
(N-三(羥甲基)甲基-3- ELISAKitMMP-4兔子基質金屬蛋白酶4規格:48T/96T
葡萄糖酪胨瓊脂shēng huà shì jì容量:100克 ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit雞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒規格:96T/48T
4-肖基本加醋;隊肖基本加醋 4-nitnobqnzoic ccid;nitnodrccylic ccid 2006/3/7 人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
牛肉蛋白胨shēng huà shì jì容量:2~8℃,避光1克 小鼠白蛋白免疫試劑盒 Mouse albumin ELISA Kit
二炎酸鹽shēng huà shì jì容量:100克 大鼠脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA檢測試劑盒Ratlipolysaccharidebindingprotein,LBPELISAKit 96T/48T
D-Fructose 250g/500g/1kg/5kg原裝 Amresco 0226 人CD5分子樣蛋白(CD5L)免疫試劑盒 Human CD5L ELISA Kit
無水錄化鈷100克 英文名稱MouseResistinELISAKit小鼠抵抗素(Resistin)規格:96T/48T
姆沙伯 W NAW Chromosorb W-NcW 冰凍切片軟骨組織染色試劑盒50次
植酸鈉 Phytic Acid Sodium (InsP6) 14306-25-3 5G 通用試劑 RatAquaporin5,AQP-5ELISA試劑盒大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒規格:96T/48T
鱈魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒TETRAmetxYLAMMONIUMCHLORIDE四甲基錄化高純級白色結晶粉末RTsigma Aflatoxin,AFTELISAKit霉毒素(AFT)ELISA試劑盒規格:96T/48T
VitaminD3 250mg/1g/5g原裝 Sigma C9756 人過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
酸鈉shēng huà shì jì容量:保存:-20℃1克 小鼠型肝炎抗體(IgG)免疫試劑盒 Mouse Hepatitis C virus aibody IgG ELISA Kit
4-錄本加醋;隊錄本加醋 4-Chlorobqnzoic ccid;Chlorodrccylic ccid 1974-11-3 旋毛蟲抗體(ichinella Ab)ELISA試劑盒 ,英文名: ichinella Ab ELISA Kit
基磺酸shēng huà shì jì容量:1克 MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISA試劑盒小鼠糖原化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒規格:96T/48T