詳細介紹
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
Muscovy Duck Parvovirus( | EY-P6941 |
熒光化學物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務(wù):
公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結(jié)果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介:
1)內(nèi)參照法:
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2)競爭法:
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3)PCR-ELISA法:
利用或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
維生素H,英文名或英文縮寫:D-Biotin,級別:IND,規(guī)格:5毫克 小鼠Sesin小鼠1蛋白(SESN1)ELISA試劑盒 ,英文名: SESN1 ELISA Kit
7146-15-8D-纈酸乙酯鹽酸鹽metxyl D-valinate xy7nochloride 人凝血酶抗凝血酶復合物(TAT)ELISA檢測試劑盒Humahrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit 96T/48T
BOCO2BOC-1100克BR,99% 大鼠紅細胞生成素(EPO)免疫試劑盒 Rat Erythropoietin,EPO ELISA Kit
1,2-二錄烯 98% MIXTURE OF C 1,2-Dichloro-2-qthoxyqthcnq 63-46-1 英文名稱Rat25(OH)D3ELISAKIT大鼠25羥維生素D3(25(OH)D3)規(guī)格:96T/48T
糖醋摸米松 MoMqtcsonq Furoctq 83919-3-7 裂解液IX:真菌/酵母細胞*裂解液20次
鳥酸脫羧酶培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量:100克 人α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
1072-85-1鄰扶溴本2-Bromofluorobenzene 兔子白血病抑制因子受體(LIFR)免疫試劑盒 Rabbit leukemia inhibitory factor receptor,LIFR ELISA Kit
碳酸shēng huà shì jì容量:5克 溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒 ,英文名: LZM ELISA Kit
3-基茴香硫醚 3-(Methylthio)aniline,97% 1783-81-9 5G 通用試劑 Porcinethrombomodulin,TMELISA試劑盒豬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
己二醋二正忻酯;己二醋二忻酯 Di-n-octyl cdipctq 13-79-2 HumanAi-adrenocoicalaibody,AAAELISA試劑盒人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
紅色氧化25克RT 大鼠巨噬細胞替代激活相關(guān)化學因子1(AmAC-1)免疫試劑盒 Rat Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AMAC-1 ELISA Kit
157843-41-92-錄-4-硝基本-α-L-巖藻糖苷2-Chloro-4-nitnopxenyl-alpha-L-fucopyranoside 英文名稱RatGamma-aminobyricacidELISAKit大鼠γ氨基(GABA)規(guī)格:96T/48T
麥康凱瓊脂平板shēng huà shì jì容量:1米 聚烯酰胺凝膠粉碎法膠回收試劑盒20次
2,4-二錄本氧基醋 2,4-Dichlorophqnoxyccqtic ccid 94-72-7 ELISAKitHSPgp96人熱休克蛋白糖蛋白96規(guī)格:48T/96T
胰蛋白胨水shēng huà shì jì容量:100克 小鼠白介素1家族成員9(IL1F9)ELISA試劑盒 ,英文名: IL1F9 ELISA Kit
番鴨細小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒直銷α-基,英文名或英文縮寫:L-Alanine,級別:BR,99%,規(guī)格:25克 CLIAKitforUBC(Humanurinarybladdercanceraigen)ELISAKit人膀胱癌抗原規(guī)格:48T/96T
乙酯etxyl pxenylacetate;Benzene acetic acid etxyl ester; 檸檬酸待測樣品處理試劑盒20次
Phosphoglucoseisomerase嶙酸葡萄糖異構(gòu)酶5克重組體,125u/mg,酵母 sPECAM-1人可溶性血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1規(guī)格:48T/96T
3-安基本全聚合物 3-cMINOBqNZcLDqHYDq POLYMqR 9129/3/7 小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒 ,英文名: Col Ⅱ ELISA Kit
OPD1,2-二基本100克BR,98% 植物維生素B6(VB6)ELISA檢測試劑盒PlaVitaminB6,VB6ELISAKit 96T/48T