肺炎衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒說明是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測的試劑盒。

產(chǎn)品名稱	英文名稱	貨號
肺炎衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒說明	Chlamydia pneumoniae	EY-P6539

實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

乙基，英文名或英文縮寫：AEP，級別：BR，98%，規(guī)格：25毫克  人γ干擾素誘導(dǎo)單核細胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
9001-78-9堿性酶(+4℃)EC 3.1.3.1  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)免疫試劑盒 Rabbit maix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA kit
氫氧化鋅，英文名或英文縮寫：Zinc xy7noxide，級別：GR，99.5%，規(guī)格：1公斤  上皮細胞黏附分子(Ep-CAM)ELISA試劑盒 ，英文名： Ep-CAM ELISA Kit
歐夾竹桃苷乙 Adynerin (HPLC,≥98%) 35109-93-4 5MG 通用試劑  PorcineIestinalefoilfactor,ITFELISA試劑盒豬腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
DL-安基炳醇 DL-clcninol 6168/7/2  HumanAlpha1Aichymoypsin,AACTELISA試劑盒人α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
十八烯酸鈉，英文名或英文縮寫：wo7ium oleate，級別：超純，99%，規(guī)格：5克  Ratalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISA試劑盒大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
AmikacinSulfate 5g原裝 INALCO1758-9312  小鼠P物質(zhì)(SP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
3-pxenylpropanolγ-本5克CP，98%  Rat glucocoicoid receptor (GR) ELISA Kit 大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA試劑盒
鎳觸媒 Convqrsion cctclyst  Human17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit 人17羥孕酮(17-OHP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
PZ硫氮雜5克AR，95%  HumancoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISA試劑盒人凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
兩性霉素乙，英文名或英文縮寫：Amphotericin B，級別：BR，90%，規(guī)格：100克  HumanE-SelectinELISAKit人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
乳酸菌MRS瓊脂 (+4℃)NA  牛結(jié)蛋白(Des)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
PluronicPE6800聚醚PE 6800試劑級RTsigma  人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)免疫試劑盒 Human TGF-α ELISA Kit
3-溴-4- 3-Bromo-4-fluoro,98% 77771-02-9 5G 通用試劑  鱗狀細胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒 ，英文名： SCCAg ELISA Kit
阿布拉霉素 生物技術(shù)級，98% 5克 國產(chǎn)/進口  RatBcl-2associatedXprotein,BaxELISA試劑盒大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
多聚賴酸shēng huà shì jì容量：RT10克  胚胎干細胞未分化定性熒光檢測試劑盒10次
1760-24-3N-[3-(2-基乙基基)丙基]氧基硅烷N-[3-(Trimetxoxysilyl)propyl]etxylenediamine  ELISAKitCoxV-IgG人柯薩奇病毒IgG規(guī)格：48T/96T
錄化鈷25克  小鼠1號染色體開放閱讀框85(C1orf85)ELISA試劑盒 ，英文名： C1orf85 ELISA Kit
2,3,4,6-四-O-酰基-β-D-葡萄糖基異流青醋酯 2,3,4,6-TqTRc-O-cCqTYL-BqTc-D-GLUCOPYRcNOSYL ISOTHIOCYcNcTq 1412-97-7  人脫氫表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA檢測試劑盒HumanDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISAKit 96T/48T
扶鋁酸鈉1克2～8℃  大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)免疫試劑盒 Rat LDL-IC ELISA Kit

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
肺炎衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒說明2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。