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FTA 血片 DNAout50 次圖片

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更新時間：2018-12-04 17:09:09瀏覽次數(shù)：280次

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詳細介紹

FTA 血片 DNAout50 次圖片實驗要點：
1．CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。
2．在適條件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過，某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質(zhì)，特別是多糖，使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性，但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液，可減輕這兩種現(xiàn)象，同時可加入適量的（*——=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白質(zhì)層緊密，使水相和有機相分層較好。細菌的培養(yǎng)和收集將含有質(zhì)粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12 小時至對數(shù)生長后期。非凍型組織RNA保存液小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
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操作流程：
1． FTA 血片 DNAout50 次圖片根據(jù)要保存的各樣本的體積，計算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應當是組織體積的10倍（100mg組織約用1ml RNAwait）；離心收集2×107細胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原則是：量寧多勿少。建議在實際操作中不要稱量組織，而直接根據(jù)目測結(jié)果加入RNAwait量，以加快操作和減少污染。例如5mm邊長的立方體組織塊，體積為125mm3=125µl，故應當加入1．25ml的RNAwait液。
2．將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中。
3．快速將較大的組織切成厚度<0．5 cm的任意片狀，較小的組織直接取下，立即*浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0．5 cm。組織過厚則RNAwait不能有效滲入，組織中間部位的RNA不能受到保護。較大的組織可以切成厚度<0．5 cm的任意片狀后保存，較小的組織（如大鼠的腎臟、脾臟，小鼠的大部分器官）則可以直接浸入RNAwait。
4．將收集管存放于溫度適當?shù)牡胤剑娣艜r間不能超過該溫度下的長存放時間(請看技術指標)，如果要存放在-20℃或-80℃，需先將樣品在4℃放置過夜后再轉(zhuǎn)移到后的溫度。注：將樣品轉(zhuǎn)移到-20℃或-80℃前，需要棄掉保護液。
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*　MRP6 Polyclonal Antibody　多藥耐藥相關蛋白6 多克隆抗體

*　MRP5 Polyclonal Antibody　多藥耐藥相關蛋白5 多克隆抗體

*　MRP1 Polyclonal Antibody　多藥耐藥相關蛋白1 多克隆抗體
注意：
1. FTA 血片 DNAout50 次圖片對大腸桿菌可從固體培養(yǎng)基上挑取單個菌落直接進行煮沸法提取質(zhì)粒DNA。
2. 煮沸法中添加*有一定限度,濃度高時,細菌裂解效果反而不好。有時不同*也能溶菌。
3. 提取的質(zhì)粒DNA 中會含有RNA,但RNA 并不干擾進一步實驗,如限制性內(nèi)切酶消化,亞克隆及連接反應等。