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大鼠淋巴細胞分離液 1.083200mL說明書

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更新時間：2018-12-20 13:50:30瀏覽次數：571次

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詳細介紹

大鼠淋巴細胞分離液 1.083200mL說明書的產品圖片：

注意：
1. 大鼠淋巴細胞分離液 1.083200mL說明書對大腸桿菌可從固體培養基上挑取單個菌落直接進行煮沸法提取質粒DNA。
2. 煮沸法中添加*有一定限度,濃度高時,細菌裂解效果反而不好。有時不同*也能溶菌。
3. 提取的質粒DNA 中會含有RNA,但RNA 并不干擾進一步實驗,如限制性內切酶消化,亞克隆及連接反應等。
操作流程：
1． 大鼠淋巴細胞分離液 1.083200mL說明書根據要保存的各樣本的體積，計算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應當是組織體積的10倍（100mg組織約用1ml RNAwait）；離心收集2×107細胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原則是：量寧多勿少。建議在實際操作中不要稱量組織，而直接根據目測結果加入RNAwait量，以加快操作和減少污染。例如5mm邊長的立方體組織塊，體積為125mm3=125µl，故應當加入1．25ml的RNAwait液。
2．將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中。
3．快速將較大的組織切成厚度<0．5 cm的任意片狀，較小的組織直接取下，立即*浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0．5 cm。組織過厚則RNAwait不能有效滲入，組織中間部位的RNA不能受到保護。較大的組織可以切成厚度<0．5 cm的任意片狀后保存，較小的組織（如大鼠的腎臟、脾臟，小鼠的大部分器官）則可以直接浸入RNAwait。
4．將收集管存放于溫度適當的地方，存放時間不能超過該溫度下的長存放時間(請看技術指標)，如果要存放在-20℃或-80℃，需先將樣品在4℃放置過夜后再轉移到后的溫度。注：將樣品轉移到-20℃或-80℃前，需要棄掉保護液。
大鼠淋巴細胞分離液 1.083200mL說明書實驗要點：
1．CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。
2．在適條件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過，某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質，特別是多糖，使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．飽和酚雖然可有效地使蛋白質變性，但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液，可減輕這兩種現象，同時可加入適量的（*——=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白質層緊密，使水相和有機相分層較好。細菌的培養和收集將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。非凍型組織RNA保存液小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
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