[1] 用無菌吸管吸棄瓶內舊的培養基；
[2] 用 PBS 洗二遍，以防止殘留培養液中的血清對*的抑制作用，向瓶內加入
0.5--0.8 ml *（以 25cm2），輕輕搖動培養瓶，使*流遍所有的細胞表面；
加入的消化液適量，因為消化液過多對細胞有損傷，同時也需要較多的含血清培養液去中和；
[3] 消化在 37℃培養箱或室溫 25℃以上的環境下進行消化，消化 2--5 min 后，把培
養瓶放在顯微鏡下觀察，發現胞質回縮、細胞間隙增大，細胞變圓后，立即將培養瓶
立起并加入少許含血清的培養液，終止消化；
[4] 用無菌吸管反復吹打瓶壁細胞，吹打過程按順序進行，從培養瓶底部一邊開始到另一
邊結束，以確保所有底部都被吹打到；吹打過程中動作要輕柔，盡可能不要出現泡沫，
這些都損傷細胞；
[5] 加入新鮮含 10%胎牛血清的培養液，然后將原培養瓶中的細胞懸液吸出，分別接種在
新的培養瓶中。
懸浮細胞的傳代：因為懸浮生長細胞不貼壁，故傳代時不用采用消化法，可直接傳代或
離心收集細胞后傳代。直接傳代即讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清洗掉 1/2—2/3，然
后用吸管吹打形成細胞懸液后，再傳代。
懸浮細胞多采用離心方法傳代，即將細胞連同培養液一并轉移到離心管內，離心
800—1000r/min，5min，然后去除上清，加新的培養液到離心管內，用吸管吹打使之形成細
胞懸液，然后傳代接種。
部分貼壁生長的細胞，不經消化處理直接吹打也可使細胞從壁上脫落下來，而進行傳代。
但這種方法于部分貼壁不牢的細胞，如 Hela 細胞等。直接吹打對細胞損傷較大，導致較
大數量的細胞丟失，因此絕大部分貼壁生長的細胞均需消化后，才能吹打傳代。
