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蛋白印跡用緩沖液及洗滌液

閱讀:405發布時間:2016-4-22

    ELISA試劑盒轉印緩沖液提供了電極之間的電連續性,其必須是導電的。它還提供了一個化學環境,能維持蛋白質的溶解度,又不妨礙轉移過程中蛋白質吸附到膜上。
傳統的轉印緩沖液包含緩沖系統和甲醇。Tris*緩沖液,常用于槽轉印系統中。這種緩沖液的pH值為8.3,比大多數蛋白的等電點(pI)要高。在凝膠上分離的蛋白質帶負電荷,向陽極遷移。由于槽內的緩沖液是混合的,故轉移過程中的離子分布保持相對恒定。
在蛋白測序應用中,建議使用10 mM CAPS緩沖液(pH=11)。凝膠電泳緩沖液中殘留的*導致蛋白測序過程中出現高背景。通過改變轉印緩沖液的配方,這種假象明顯減少。
CAPS轉移緩沖液適用于Western Blot實驗中把蛋白質轉移到PVDF膜或硝酸纖維素(NC)膜上,以便進行抗體的孵育和下游實驗。 CAPS轉移緩沖液(高分子量)主要由CAPS、DTT、甲醇等組成,緩沖范圍pH9.7-11.1。適用于大分子量蛋白質(>61KD)轉移到PVDF膜或硝酸纖維素膜,效果優于普通的Western轉移緩沖液,直接使用
 
轉印緩沖液甲醇的功能
添加到轉印緩沖液中的甲醇有兩個主要功能:
• 穩定凝膠的尺寸。
• 從蛋白質分子上解離出復合的SDS。
聚丙烯酰胺是一種水凝膠,具有吸收水分的能力。在純水中,各個維度的凝膠尺寸都有相當量的增加。溶脹度也取決于凝膠中所使用的丙烯酰胺的濃度。高濃度的凝膠比低濃度的凝膠溶脹得更多。梯度膠會明顯突出這種影響,其底部高濃度的區域比頂部溶脹得更多。開始時是矩形的凝膠可能會變成梯形。添加到轉印緩沖液中的甲醇能zui大限度地減少凝膠溶脹,當甲醇濃度為10%-20%時,尺寸穩定性可相當快速地實現。當甲醇濃度較低時,平衡需要更長的時間才能實現。如果在轉移過程中發生尺寸改變,蛋白質的分辨可能會損失。
甲醇可幫助從蛋白質分子上解離所復合的SDS。盡管SDS對凝膠上單個蛋白質的分辨很必要,但是對于有效印跡卻是極為不利的。首先,SDS的結合給蛋白質分子帶來高的負電荷密度,導致蛋白質分子非常快速地穿過膜,減少在孔結構內的停留,從而降低分子間相互作用的機會。其次,通過包被蛋白質分子,SDS限制蛋白質與PVDF進行分子接觸的能力。這些影響隨著蛋白質的分子量降低而增加。甲醇通過解離SDS,并提高蛋白質分子與膜結合的可能性,從而減少這兩方面的影響。
 
轉膜洗滌液
 
TBS緩沖液是生物學中常使用的等滲緩沖鹽溶液,主要用于免疫組化和原位雜交,酶聯免疫等實驗中,清洗免疫印跡實驗中非特異性結合的抗體等。由 Tris-HCl 構成穩定的PH緩沖體系,NaCl 提供等滲條件。本產品為 20×濃縮液,稀釋后使用。組分濃度 Tris 200 mM NaCl 3 M PH 7.5-7.6使用時稀釋成 1×,可加入 0.05% Tween-20,用于免疫印跡膜清洗。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

ELISA試劑盒


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