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體外培養細胞的分型

閱讀:436發布時間:2016-5-30

 體外培養細胞的分型ELISA試劑盒

(一)貼附型:大多數培養細胞貼附生長,屬于貼壁依賴性細胞,大致分成以下四型:

(1)成纖維細胞型:胞體呈梭型或不規則三角形,*有卵圓形核,胞質突起,生長時呈放射狀。除真正的成纖維細胞外,凡由中胚層間充質起源的組織,如心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內皮等常呈本型狀態。培養中細胞的形態與成纖維類似時皆可稱之為成纖維細胞。

(2)上皮型細胞:細胞呈扁平不規則多角形,*有圓形核,細胞彼此緊密相連成單層膜。生長時呈膜狀移動,處于膜邊緣的細胞總與膜相連,很少單獨行動。起源于內、外胚層的細胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態。

(3)游走細胞型:呈散在生長,一般不連成片,胞質常突起,呈活躍游走或變形運動,方向不規則。此型細胞不穩定,有時難以和其他細胞相區別。

(4)多型細胞型:有一些細胞,如神經細胞難以確定其規律和穩定的形態,可統歸于此類。

(二)懸浮型:見于少數特殊的細胞,如某些類型的癌細胞及白血病細胞。胞體圓形,不貼于支持物上,呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。
 

  培養細胞的生長和增殖過程:體內細胞生長在動態平衡環境中,而組織培養細胞的生存環境是培養瓶、皿或其它容器,生存空間和營養是有限的。當細胞增殖達到一定密度后,則需要分離出一部分細胞和更新營養液,否則將影響細胞的繼續生存,這一過程叫傳代(Passage或Subculture)。每次傳代以后,細胞的生長和增殖過程都會受一定的影響。另外,很多細胞在體外的生存也不是無限的,存在著一個發展過程。所有這一切,使組織細胞在培養中有著一系列與體內不同的生存特點。
 

(一)培養細胞生命期(Life Span of Culture Cells):所謂培養細胞生命期,是指細胞在培養中持續增殖和生長的時間。體內組織細胞的生存期與完整機體的死亡衰老基本相一致。人胚二倍體成纖維細胞培養,在不凍存和反復傳代條件下,可傳30~50代,相當于150~300個細胞增殖周期,能維待一年左右的生存時間,zui后衰老凋亡(Apoptosis)。如供體為成體或衰老個體,則生存時間較短;如培養的為其它細胞,如肝細胞或腎細胞,生存時間更短,僅能傳幾代或十幾代。只有當細胞發生遺傳性改變,如獲永生性或惡性轉化時,細胞的生存期才可能發生改變。正常細胞培養時,不論細胞的種類和供體的年齡如何,在細胞全生存過程中,大致都經歷以下三個階段:

(1)原代培養(Primary Culture)期:也稱初代培養,即從體內取出組織接種培養到*次傳代階段,一般持續1一4周。此期細胞呈活躍的移動,可見細胞,但不旺盛。初代培養細胞與體內原組織在形態結構和功能活動上相似性大。細胞群是異質的(Heterogeneous),也即各細胞的遺傳性狀互不相同,細胞相互依存性強。

(2)傳代期:初代培養細胞一經傳代后便改稱做細胞系(Cell Line)。在全生命期中此期的持續時間zui長。在培養條件較好情況下,細胞增殖旺盛,并能維持二倍體核型,呈二倍體核型的細胞稱二倍體細胞系(Diploid Cell Line)。為保持二倍體細胞性質,細胞應在初代培養期或傳代后早期凍存。當前世界上常用細胞均在不出十代內凍存。如不凍存,則需反復傳代以維持細胞的適宜密度,以利于生存。但這樣就有可能導致細胞失掉二倍體性質或發生轉化。一般情況下當傳代10~50次左右,細胞增殖逐漸緩慢,以至*停止,細胞進入第三期。

(3)衰退期:此期細胞仍然生存,但增殖很慢或不增殖;細胞形態輪廓增強,zui后衰退凋亡。

在細胞生命期階段,少數情況下,在以上三期任何一點(多發生在傳代末或衰退期),由于某種因素的影響,細胞可能發生自發轉化(Spontaneous Transformation)。轉化的標志之一是細胞可能獲得永生性(Immortality)或惡性性(Malignancy)。細胞永生性也稱不死性,即細胞獲持久性增殖能力,這樣的細胞群體稱無限細胞系(Infinite Cell Line),也稱連續細胞系(Continuous Cell Line)。無限細胞系的形成主要發生在第二期末,或第三期初階段。細胞獲不死性后,核型大多變成異倍體(Heteroploid)。細胞轉化亦可用人工方法誘發,轉化后的細胞也可能具有惡性性質。細胞永生性和惡性性非同一性狀。

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