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昆蟲表達系統技術

閱讀:407發布時間:2015-7-3

ELISA試劑盒昆蟲表達系統是一類應用廣泛的真核表達系統,它具有同大多數高等真核生物相似的翻譯后修飾加工以及轉移外源蛋白的能力。利用重組桿狀病毒在昆蟲細胞體系中表達外源蛋白
是目前較為流行的表達方式,其表達的蛋白水平高達1~500mg/L,但受到諸多因素的限制和影響,如培養基質量、供氧情況、保證對數生長等[3]。
桿狀病毒是已知昆蟲病毒中zui大的類群,是發現zui早、研究zui多且適用意義很大的昆蟲病毒。桿狀病毒的基因組為單一閉合環狀雙鏈DNA分子,大小為80~160 kb,其基因組可在昆蟲細胞核復制和轉錄。DNA復制后組裝在桿狀病毒的核衣內,后者具有較大的柔韌性,可容納較大片段的外源DNA插入,因此是表達大片段DNA的理想載體[6]。ELISA試劑盒另外,此系統所用的多角體蛋白啟動子,是一個很強的真核生物啟動子。常用的桿狀病毒包括苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcNPV)和家蠶型多角體病毒(BmNPV),常用的宿主細胞則來源于草地夜蛾Sf9細胞,用于表達外源基因的質粒來源于PUC系列,其含有一個多克隆位點和多角體蛋白啟動子。桿狀病毒系統的主要有點包括①重組蛋白具有完整的生物學功能,如蛋白的正確折疊、二硫鍵的搭配;②蛋白翻譯后的加工修飾;③表達水平高,可達總蛋白量的50%;ELISA試劑盒④可容納大分子的插入片段;⑤能同時表達多個基因。主要缺點是外源蛋白表達處于極晚期病毒啟動子的調控之下,這時由于病毒感染,細胞開始死亡[7]。
PR124堿性磷酸酶底物顯色試劑盒(BCIP/NBT)100 ml
100bp DNA Ladder Marker300 μl(50 rxn)
1kb DNA Ladder Marker300 μl(50 rxn)
1kb Plus DNA Ladder Marker300 μl(50 rxn)
DL2000 DNA Marker300 μl(50 rxn)
DL2000 Plus DNA Marker300 μl(50 rxn)
DL10000 DNA Marker300 μl(50 rxn)
DL15000 DNA Marker300 μl(50 rxn)
DNA Marker I300 μl(50 rxn)
DNA Marker II300 μl(50 rxn)
DNA Marker III300 μl(50 rxn)
λDNA/Hind III300 μl(50 rxn)
普通瓊脂糖凝膠RNA電泳6× 上樣緩沖液5 ml
20× 快速電泳緩沖液500 ml
50× TAE Buffer500 ml
5× TBE Buffer500 ml


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