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細胞凍存的方法

閱讀:268發布時間:2015-9-23

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。

細胞凍存的方法:
1.細胞:選對數生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。 
2.計數:按常規方法把細胞制成細胞懸液,計數,令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。 
3.凍存液:先用培養液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。 
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。 
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。 

Phospho-HER4 (Tyr1162) 英文名稱: 磷酸化HER4抗體
Phospho-HER4 (Tyr1188) 英文名稱: 磷酸化HER4抗體
HSD17B3 英文名稱: 羥類固醇脫氫酶17β3抗體
HSD11B1 英文名稱: 羥基類固醇脫氫酶11β1抗體
HSD3B1 英文名稱: 滋養層細胞抗原3β-HSD抗體
Acetyl-Histone H4(K8) 英文名稱: 乙酰化組蛋白H4抗體
phospho-HMGN1(Ser20+Ser24) 英文名稱: 磷酸化高遷移率核小體結合蛋白1
HE4 英文名稱: 附睪分泌蛋白4抗體
Histone H3 (Tri Methyl K4) 英文名稱: *基化組蛋白H3抗體
HMGCR 英文名稱: 三羥基*基*還原酶抗體
Heparan Sulfate Proteoglycan 2 英文名稱: 硫酸乙酰肝素蛋白多糖2
HCA2 英文名稱: 肝癌相關抗原hca2
Hexokinase 3 英文名稱: 己糖激酶3抗體


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