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2019-6-10 閱讀(1514)
Sh Ble基因篩選抗生素：博萊霉素（Zeocin）和腐草霉素（Phleomycin）
（maokangbio整理，交流學習用)
博萊霉素（Bleomycins，BLMs）是由輪枝鏈霉菌（Streptomyces verticillus）代謝產生的一種抗腫瘤糖肽抗生素大家族，該家族的成員目前使用比較多的是博萊霉素（Bleomycin）家族和腐草霉素（Phleomycin）家族，前者主要用做抗腫瘤化合物，與其他的抗癌劑聯合使用，用于治療淋巴瘤、鱗狀細胞癌和睪完癌等。后者主要用作分子遺傳學研究中的一種選擇性抗生素，用來篩選攜帶抗性基因Sh ble等的穩定轉染細胞。
我司（懋康生物）在銷售博萊霉素BLMs家族抗生素的過程中常遇到用戶詢問幾種熱賣產品的區別，現做出以下解釋，供交流學習用。
對于腐草霉素（Phleomycin）（MS0008-1ML）, 是一種糖肽類抗生素，結構上類似于抗生素Bleomycin (BLM)。純化的腐草霉素主要由腐草霉素D1（Phleomycin D1）（末端胺基是胍丁胺）以銅離子螯合和鹽酸鹽形式提供。腐草霉素阻斷細胞周期進入S期，雖然腐草霉素類似于Bleomycin，能破壞DNA，但不用作一種抗腫瘤劑。目前腐草霉素的作用機理并未*得以闡明，據報道由于修飾的二噻唑部分，其不能插入DNA。RAD6 DNA修復基因在突變酵母內對腐草霉素抗性是必須的。
分子遺傳實驗中腐草霉素用作一種選擇性抗生素，其具廣譜的毒性，對細菌、真核微生物和植物和動物細胞呈體內活性。腐草霉素因此能用于鑒定和篩選含腐草霉素抗性基因比如Sh ble基因的各種細胞。
對于Zeocin™（MS0009-125MG）是博萊霉素/腐草霉素（bleomycin/phleomycin）抗生素家族的成員之一，從輪枝鏈霉菌Streptomyces verticillus中分離得到，對細菌、真菌（包括酵母菌）、植物和哺乳動物細胞具很強的毒性。Zeocin™是腐草霉素D1的商業名稱，一種堿性、水溶性、銅離子螯合的糖肽抗生素。銅離子的存在使得溶液為藍色，此銅螯合的形式為無活性。一旦進入細胞后，二價銅離子（Cu2+）被還原為一價銅離子（Cu+），并被細胞內的巰基化合物去除。銅離子被去除后，Zeocin™被活化，嵌入DNA使其斷裂，終導致細胞死亡。
腐草霉素（Phleomycin）與Zeocin™有效成分基本差不多，這也是這兩種化合物的CAS號是一致的。但也有些許差異，腐草霉素（Phleomycin）建議用于對Zeocin™敏感性比較差的細胞，比如：絲狀真菌和某些酵母菌。
腐草霉素（Phleomycin）與Zeocin™的基本特性（見下表格）：更多信息請見maokangbio整理內容。
基本特性 | 腐草霉素（Phleomycin） | 博萊霉素（Zeocin™） |
編號 | MS0008-1ML（20MG）/5ML | MS0009-125MG/1G |
報價 | 598/2768 | 420/2850 |
CAS NO. | 11006-33-0 | 11006-33-0 |
外觀 | 藍色溶液（20mg/ml） | 藍色溶液（100mg/ml） |
篩選濃度 | 大腸桿菌篩選：25-50μg/mL（低鹽LB培養基，NaCl濃度不能超過5g/L） 酵母菌篩選：50-300μg/mL（YPD或基本培養基） 哺乳動物細胞篩選：50-1000μg/mL（合適培養基，根據細胞系而不同） | 大腸桿菌：含5µg/ml腐草霉素的低鹽LB固體培養基； 酵母菌：含10µg/ml腐草霉素的YEPD培養基； 真菌：含10-50µg/ml腐草霉素的再生培養基，取決于宿主菌敏感性。 植物細胞：5-25µg/ml腐草霉素，取決于植物類型； 動物細胞：5-50 µg/ml腐草霉素，初次實驗使用殺滅曲線來篩選加工作濃度； |
Sh ble基因賦予抗性的原理：來自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因編碼一種13,665Da大小的蛋白，該產物以化學計量方式結合Zeocin或phleomycin，抑制其DNA雙鏈切割活性。因此，能表達此蛋白的宿主細胞被賦予Zeocin或phleomycin抗性。
—Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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