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OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

OverExpress C43(DE3) pLysS；OverExpress C43(DE3)；BL21 (DE3)；OverExpress C41(DE3)；表達感受態細胞；毒性蛋白表達；pET表達載體；

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菌株描述

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大腸桿菌（E. Coli）菌株，有效表達不同物種有機生物體包括細菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳動物來源的毒性蛋白。

OverExpress菌株含賦予毒性蛋白抗性的遺傳突變。C41(DE3)菌株來源于BL21(DE3)，此菌株含一個突變，能降低T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的水平，從而預防許多重組毒性蛋白過表達引起的細胞死亡。C43(DE3)菌株來源于C41(DE3)，通過篩選對另一個不同毒性蛋白的抗性菌株而獲得。C43(DE3)與C41(DE3)菌株相比，至少攜帶另一個不同突變，使其獲得更廣泛更高的毒性蛋白耐受能力。

正如BL21(DE3)菌株，OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都含DE3區，所有菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因），適用于靶基因克隆進入T7啟動子表達載體比如pET系列的蛋白生產。

OverExpress C41(DE3) pLysS和C43(DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質粒，具有氯霉素抗性，能夠表達少量T7溶菌酶（一種天然的T7 RNA聚合酶抑制劑）。T7溶菌酶能作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，降低目的基因的背景表達水平，但不會干擾IPTG誘導的表達，從而能夠穩定重組表達的蛋白，特別是毒性蛋白。氯霉素（34 µg/ml）需加入菌株培養基內以維持pLysS質粒。

OverExpress C43(DE3) pLysS菌株基因型：F^– ompT hsdS_B (rB^- mB^-) gal dcm (DE3) pLysS (Cm^R)

產品描述

本品是大腸桿菌OverExpress C43(DE3) pLysS菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達1×10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

產品包裝

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸，感受態細胞應在-80℃保存。

2） 感受態細胞在冰上融化，不可在冰上放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到低。

5） 產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6） 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

7） 誘導時，IPTG濃度范圍可選：0.1~2mM。

8） 為了得到足量的蛋白，需就加誘導時間、溫度、IPTG濃度進行優化。

9） OverExpress C43(DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質粒，除復蘇培養基不含抗生素外，其他所用固體培養基、液體培養基均應添加34µg/ml氯霉素，以防質粒丟失。

10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加700 μl無菌的LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取50μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含34µg/ml氯霉素以及所選質粒篩選抗生素的LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養過夜。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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附錄I 蛋白誘導步驟（僅作參考）

1）從新鮮涂布平板上挑取一單克隆，轉移到含相應抗生素的5ml LB液體培養基內。需注意對于OverExpress pLysS菌株，除篩選抗生素之外還要加入氯霉素（34 µg/ml）。

2）37℃，200rpm搖菌培養過液。為了小化誘導前目的蛋白的小化表達，添加葡萄糖（終濃度為0.2% w/v）到生長培養基內。

3）將步驟2）中過夜培養的菌液吸取0.5ml接種到含相應抗生素的50ml LB液體培養基內（建議使用500ml三角瓶培養）。

4）37℃，150rpm搖菌培養直至OD₆₀₀達到0.6~0.8（建議0.6，約2.5h）。

5）【可選】用移液槍吸取1ml培養物到干凈的離心管內，置于冰上直至用于凝膠分析或保存在-20℃。這是非誘導的對照樣本。

5）加入IPTG使其終濃度為1mM。目的蛋白的加誘導時間可能在2~16h，依蛋白而異。

6）37℃，120rpm培養3~4h。為了確定目的蛋白的加誘導時間，建議作一個時間周期優化實驗，范圍從2~16h。

7）將培養物冰浴10min。4℃，5,000 x g離心10min收集菌株。

8）吸掉上清，將沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的溫度）。

IPTG母液（1M）配制

稱量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于適量去離子水，充分溶解后，調整終體積到10ml，并過濾除菌，即得到1M ITPG母ye。

氯霉素母液（34mg/ml）配制

稱量適量氯霉素溶于乙醇配制成34mg/ml儲存液，-20℃保存。工作濃度為34µg/ml。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

大腸桿菌化學感受態細胞  表達分析

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