| 上海懋康生物科技有限公司
主營產品： 硫酸諾爾斯菌素,D-熒光素,雷帕霉素 |
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更新時間：2024-04-07 14:20:18瀏覽次數：637
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C58C1 Electrocompetent Cell
農桿菌電轉感受態細胞
產品標簽：
C58C1；MSU440；K599；Agrobacterium rhizogenes 發根農桿菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 鏈霉素；Rifampicin利福平；
產品訂購：
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格（元） |
MF2454-0500UL | C58C1 Electrocompetent Cell 農桿菌電轉感受態細胞 | 10×50μl | 720 |
MF2454-2500UL | C58C1 Electrocompetent Cell 農桿菌電轉感受態細胞 | 50×50μl | 3000 |
【好消息】：見我司懋康生物整理的根癌（發根）農桿菌感受態細胞技術專題。
菌株描述
發根農桿菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科農桿屬的一種革蘭氏陰性土壤細菌，能夠侵染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。起關鍵作用的是其攜帶的Ri質粒，含有負責發根自主性生長和冠癭堿合成的基因。結構上與Ti質粒類似，主要有致毒區（Vir），T-DNA區以及冠癭堿合成功能區等。
根據合成冠癭堿的不同，Ri質粒分為4種類型：1）甘露堿型；2）黃瓜堿型；3）農桿堿型；4）米奇矛型。
發根農桿菌菌株C58C1含pRiA4b農桿堿型Ri質粒，具有廣泛的宿主范圍（薔薇科，夾竹桃科，豆科，茄科，黃芩，煙草等），同時具有鏈霉素、利福平抗性。
我司懋康生物提供的C58C1電轉感受態細胞經特殊工藝制作，特別適合大質粒的轉化。基因型為Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR ) pRiA4b (agropine type)，經pCAMBIA2301質粒（卡那霉素抗性）檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產品包裝
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規格） | |
MF2454-0500UL | MF2454-2500UL | ||
MF2454-A | C58C1 Electrocompetent Cell | 10×50μl | 50×50μl |
MF2454-B | pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
注意事項
感受態細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。
整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。
3） 加入質粒的體積不應大于感受態體積的1/10。質粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導致轉化效率急劇下降。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
為確保gao轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 電轉感受態細胞中不可混入氣泡，轉化高濃度的質粒可相應減少終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過大時，由于營養不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質粒用量。
7） C58C1具鏈霉素和利福平抗性，不可用于具鏈霉素抗性或利福平抗性質粒的轉化。
8） 為了保證加的轉化效率，發根農桿菌的培養務必使用TY培養基（配方見附表1）。
9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發干凈，立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
取-80℃保存的農桿菌感受態細胞插入冰中5min，待其*融化。
往50μl感受態細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質粒DNA，用手拍打管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態細胞-質粒之后快速轉移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用【注意：質粒DNA用試劑盒抽提，且用雙蒸水溶解。由于感受態轉化效率較高，*次使用做預試驗確定加的質粒用量】。
啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數參考Bio-rad，具體使用請參考電轉儀推薦步驟來操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。
加入1ml無抗生素的TY并轉移到感受態空管中，于28℃振蕩培養2~3h。
6) 6,000rpm離心1min，留取 100ul左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的TY平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養2-3天。
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附表1 固體和液體TY培養基配方
組分Component | TY（液體）/升 | TY（固體）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物 Yeast extract | 3g | 3g |
瓊脂 Agar | / | 15g |
補水到1L，121℃，20min高壓滅菌 | 補水到1L，121℃，20min高壓滅菌 | |
氯化鈣 CaCl2 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營養液。 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營養液。 |
附表2常見發根農桿菌對抗生素敏感性總表
農桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈霉素（strep） | 利福平（rif） | 慶大霉素（gent） | 卡那霉素（kan） |
Ar A4 | S | S | S | S | R |
Ar Qual | S | R | S | R | S |
Ar 1193 | R | R | R | S | S |
K599 | S | R | S | S | S |
C58C1 | S | R | R | S | S |
MSU440 | S | R | S | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
附表3常見農桿菌抗生素配制方法
抗生素 | 配方 | 母液 | 工作液 |
羧芐青霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
硫酸卡那霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
鏈霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 10mg/ml | 50μg/ml |
慶大霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 20mg/ml | 40μg/ml |
利福平 | DMSO溶解，0.22μm有機相濾膜除菌 | 10mg/ml | 20μg/ml |
氯霉素 | 無水乙醇溶解，0.22μm有機相濾膜除菌 | 34mg/ml | 34μg/ml |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
C58C1 農桿菌電轉感受態細胞 表達分析
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