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主營(yíng)產(chǎn)品： 硫酸諾爾斯菌素,D-熒光素,雷帕霉素 |
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更新時(shí)間：2024-04-07 14:05:16瀏覽次數(shù)：479
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Ar 1193 Electrocompetent Cell
農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品標(biāo)簽：
Ar 1193；Ar A4；K599；C58C1；MSU440；Agrobacterium rhizogenes 發(fā)根農(nóng)桿菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 鏈霉素；Rifampicin利福平；
產(chǎn)品訂購(gòu)：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2462-0500UL | Ar 1193 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl | 720 |
MF2462-2500UL | Ar 1193 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×50μl | 3000 |
【好消息】：見(jiàn)我司懋康生物整理的根癌（發(fā)根）農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞技術(shù)專(zhuān)題。
菌株描述
發(fā)根農(nóng)桿菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科農(nóng)桿屬的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，能夠侵染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。起關(guān)鍵作用的是其攜帶的Ri質(zhì)粒，含有負(fù)責(zé)發(fā)根自主性生長(zhǎng)和冠癭堿合成的基因。結(jié)構(gòu)上與Ti質(zhì)粒類(lèi)似，主要有致毒區(qū)（Vir），T-DNA區(qū)以及冠癭堿合成功能區(qū)等。
根據(jù)合成冠癭堿的不同，Ri質(zhì)粒分為4種類(lèi)型：1）甘露堿型；2）黃瓜堿型；3）農(nóng)桿堿型；4）米奇矛型。
發(fā)根農(nóng)桿菌菌株Ar 1193含pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（豆科，茄科等），同時(shí)具有羧芐青霉素、鏈霉素、利福平抗性。
我司懋康生物提供Ar 1193電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。基因型為Agrobacterium rhizogenes (carbR,strR,rifR ) pRi1193 (agropine type)，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品包裝
組分編號(hào) | 組分名稱(chēng) | 貨號(hào)（規(guī)格） | |
MF2462-0500UL | MF2462-2500UL | ||
MF2462-A | Ar 1193 Electrocompetent Cell | 10×50μl | 50×50μl |
MF2462-B | pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
注意事項(xiàng)
感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件要求進(jìn)行。
3） 加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
為確保高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。
5） 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
7） Ar 1193具羧芐、鏈霉素、利福平抗性，不可用于具羧芐、鏈霉素、利福平抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。
8） 為了保證加的轉(zhuǎn)化效率，發(fā)根農(nóng)桿菌的培養(yǎng)務(wù)必使用TY培養(yǎng)基（配方見(jiàn)附表1）。
9） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min，待其*融化。
往50μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質(zhì)粒DNA，用手拍打管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細(xì)胞-質(zhì)粒之后快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用【注意：質(zhì)粒DNAhao用試劑盒抽提，且用雙蒸水溶解。由于感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率較高，*次使用hao做預(yù)試驗(yàn)確定加的質(zhì)粒用量】。
啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)參考Bio-rad，具體使用請(qǐng)參考電轉(zhuǎn)儀推薦步驟來(lái)操作），將電擊杯從冰中取出，吸水紙吸干外表面水分，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動(dòng)電擊，電擊完成快速插入冰中。
加入1ml無(wú)抗生素的TY并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。
6) 6,000rpm離心1min，留取 100ul左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的TY平板上，用無(wú)菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
MF2306-0500UL | EHA101 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2307-0500UL | EHA105 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2308-0500UL | LBA4404 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2309-0500UL | GV3101 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2310-0500UL | AGL1 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2301-1000UL | EHA101 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2302-1000UL | EHA105 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2303-1000UL | LBA4404 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2305-1000UL | AGL1 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2304-1000UL | GV3101 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2451-1000UL | MSU440 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2452-0500UL | MSU440 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2453-1000UL | C58C1 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2454-0500UL | C58C1 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2455-1000UL | K599 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2456-0500UL | K599 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2457-1000UL | Ar A4 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2458-0500UL | Ar A4 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2459-1000UL | Ar Qual Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2460-0500UL | Ar Qual Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
MF2461-1000UL | Ar 1193 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MF2462-0500UL | Ar 1193 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×50μl |
附表1 固體和液體TY培養(yǎng)基配方
組分Component | TY（液體）/升 | TY（固體）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物 Yeast extract | 3g | 3g |
瓊脂 Agar | / | 15g |
補(bǔ)水到1L，121℃，20min高壓滅菌 | 補(bǔ)水到1L，121℃，20min高壓滅菌 | |
氯化鈣 CaCl2 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營(yíng)養(yǎng)液。 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營(yíng)養(yǎng)液。 |
附表2常見(jiàn)發(fā)根農(nóng)桿菌對(duì)抗生素敏感性總表
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈霉素（strep） | 利福平（rif） | 慶大霉素（gent） | 卡那霉素（kan） |
Ar A4 | S | S | S | S | R |
Ar Qual | S | R | S | R | S |
Ar 1193 | R | R | R | S | S |
K599 | S | R | S | S | S |
C58C1 | S | R | R | S | S |
MSU440 | S | R | S | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
附表3常見(jiàn)農(nóng)桿菌抗生素配制方法
抗生素 | 配方 | 母液 | 工作液 |
羧芐青霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
硫酸卡那霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
鏈霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 10mg/ml | 50μg/ml |
慶大霉素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | 20mg/ml | 40μg/ml |
利福平 | DMSO溶解，0.22μm有機(jī)相濾膜除菌 | 10mg/ml | 20μg/ml |
氯霉素 | 無(wú)水乙醇溶解，0.22μm有機(jī)相濾膜除菌 | 34mg/ml | 34μg/ml |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
Ar 1193 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析
Ar 1193 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析
