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技術文章

elisa試劑盒同源序列克隆法的*性

閱讀:392發布時間:2017-1-13

elisa酶聯免疫試劑盒同源序列法克隆抗病基因相對于傳統方法具有一定的*性。傳統的基因克隆方法主要有圖位克隆法和轉座子標簽法,這兩種方法都相當耗時耗力,并且在應用上有一定限制。例如大麥和小麥等作物的基因組較大并且 重復序列較多,很難構建高密度的分子標記連鎖圖譜,因而圖位克隆法分離基因相對困難;果樹難以建立理想的分離群體,同時又缺乏合適的轉座子系統,因此經典克隆抗病基因的方法都不適合。同源序列法分離 RGAs 的過程快速、簡捷, 并且應用上沒有限制,因而能夠在廣泛植物中得到普遍應用。
同源序列法與圖位克隆法和轉座子標簽法相比,更容易分離得到抗病基因。但對已克隆的抗病基因同源序列片段與已知抗病基因的比較可以看出, 抗病基因同源序列與抗病基因主要有3種關系:抗病基因同源序列與目的抗病基因無關;抗病基因同源序列與目的抗病基因緊密連鎖;抗病基因同源序列本身就是抗病基因或其假基因的一部分。這表明抗病基因同源序列與植物的抗病基因仍有較大區別。因此,應用這種方法要注意一些問題。
elisa酶聯免疫試劑盒首先,在設計引物時應盡可能考慮到可能出現的問題和目的基因可能的類別,如進行PCR 檢驗時所設計引物是否會擴增出非目的片段。其次,抗病基因在植物中多成簇或以基因家族的形式存在,難以判斷克隆產物是否為目的基因片段,且植物中有一些蛋白含LRR 或NBS 結構,如ATP 或GTP 結合蛋白,因此對獲得的RGA 必須進行轉基因檢驗,以zui終確定是否為真正的抗病基因。
RAPD PCR 試劑盒 ( 含銀染 )    100 次    S(-) 雷氯必利 (+)- 酒石酸鹽
即用型易錯 PCR 試劑盒    100 次    S1 核酸酶
線狀 DNA 清除劑    30 次    S1 核酸酶
改良 Lowry 法蛋白定量試劑盒    1000 次    SacI
玻璃勻漿器 ,1mL    1套    SalI
玻璃勻漿器 ,2mL    1套    SB203580(p38MAPK 抑制劑 )
玻璃勻漿器 ,5mL    1套    ScarabXpress T7lac 菌種
玻璃勻漿器 ,10mL    1套    SDS 溶液 ,10%,電泳
3'-RACE 試劑盒    10 次    SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )
5'-RACE 試劑盒    10 次    SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )
沉淀型 TMB 顯色試劑盒    100mL    SDS-PAGE 分離膠配膠液
DNA  CTAB 溶液,20%    100mL    SDS-PAGE 濃縮膠配膠液
柱式糞便 RNAout    50 次    SDS-PAGE 上樣液,5×
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