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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒步驟進(jìn)行操作

閱讀:254發(fā)布時(shí)間:2017-7-31

elisa酶聯(lián)免疫試劑盒步驟進(jìn)行操作:
1、收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。
收集完蛋白樣品后,為確保每個蛋白樣品的上樣量一致,需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2、電泳(Electrophoresis)
(1)、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻(xiàn)資料進(jìn)行配制,也可以使用博研生物的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
(2)、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制,也可以使用我公司的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。
(3)、上樣與電泳
冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。
電泳時(shí)通常推薦在上層膠時(shí)使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時(shí)使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設(shè)置在80-100V,高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見,也可以采用整個SDS-PAGE過程恒壓的方式,通常把電壓設(shè)置在100V,然后設(shè)定定時(shí)時(shí)間為90-120分鐘。設(shè)置定時(shí)可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過頭。
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Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅢ ELISA Kit    *G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     規(guī)格:    96T/48T
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Human replication protein A,RPA-70 ELISA Kit    人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒     規(guī)格:    96T/48T
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Human retinoic acid inducible gene/RIG-like receptor,RLR-9 ELISA Kit    人*誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)ELISA試劑盒     規(guī)格:    96T/48T
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Human Retinol binding protein,RBP ELISA Kit    人*結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒    規(guī)格:    96T/48T
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Human rheumatoid factor,RF ELISA Kit    人類風(fēng)濕因子(RF)ELISA試劑盒    規(guī)格:    96T/48T
human Rho family GTPase 1,RND1 ELISA Kit    人Rho家族GTP酶1(RND1)ELISA試劑盒    規(guī)格:    96T/48T
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit    人核糖核酸酶(RNASE)ELISA試劑盒     規(guī)格:    96T/48T
Human Rotavirus antigen,RV Ag ELISA Kit    人輪狀病毒抗原(RV Ag)ELISA試劑盒    規(guī)格:    96T/48T
Human Rotavirus,RV IgM ELISA Kit    人輪狀病毒(RV)IgM ELISA試劑盒    規(guī)格:    96T/48T
Human rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit    人的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒    規(guī)格:    96T/48Telisa酶聯(lián)免疫試劑盒

 


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