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上海撫生實業有限公司
人羊膜細胞;WISH培養,細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
產品名稱 | 人羊膜細胞;WISH培養 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 人羊膜細胞;WISH培養
形態特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 zui初以為這株細胞的起源是正常羊膜,但隨后通過同工酶分析、HeLa標記染色體和DNA指紋法分析,證實該細胞是HeLa細胞污染的;角蛋白陽性。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2~1:10傳代;每周換液2次。
傳代情況 P180
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:9,10;D13S317:13.3;D16S539:9,10;D18S51:16;D19S433:13,14;D21S11:27,28;D2S1338:17;D3S1358:15,18;D5S818:11,12;D7S820:8,12;D8S1179:12,13;FGA:21;TH01:7;TPOX:8,12;vWA:16,18;
同工酶
染色體 70~75,有若干變異染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
Beta-OHB(Human Beta-Hydroxybutyric Acid) ELISA Kit 人β羥丁酸 Multi-class antibodies 規格: 48T
HDL-C(Human High density lipoprotein cholesterol) ELISA Kit 人高密度脂蛋白* Multi-class antibodies 規格: 48T
N-MID-OT(Human N-MID Osteocalcin) ELISA Kit 人N端中段骨鈣素 Multi-class antibodies 規格: 48T
LRP-6(Human low-density lipoprotein-receptor-related protein) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體相關蛋白6 Multi-class antibodies 規格: 48T
VLDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人極低密度脂蛋白受體 Multi-class antibodies 規格: 48T
LDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體 Multi-class antibodies 規格: 48T
HDL(Human High density lipoprotein) ELISA Kit 人高密度脂蛋白 Multi-class antibodies 規格: 48T
Alpha-GST(Human Alpha-glutathione S-transferases) ELISA Kit 人α*S轉移酶 Multi-class antibodies 規格: 48T
GSH-Px kit(human) 人*過氧化物酶elisa試劑盒 Multi-class antibodies 規格: 96T
Hcy(Human Homocysteic acid) ELISA Kit 人同型半* Multi-class antibodies 規格: 48T
FFA(Human free fatty acids) ELISA Kit 人游離脂肪酸 Multi-class antibodies 規格: 48T
ON(Human osteonectin) ELISA Kit 人骨粘連蛋白 Multi-class antibodies 規格: 48TFUBP3 英文名稱: 遠端上游元件結合蛋白3抗體 ?0.2ml
Fukutin 英文名稱: 巖藻糖變旋酶抗體 ?0.2ml
FUNDC1 英文名稱: X三體綜合征相關蛋白FUNDC1抗體 ?0.2ml
Furin 英文名稱: 弗林蛋白酶抗體 ?0.2ml
FUSIP1 英文名稱: 富含*/*重復結構蛋白抗體 ?0.2ml
FUT6 英文名稱: 巖藻糖基轉移酶6抗體 ?0.2ml
FUT7 英文名稱: 巖藻糖基轉移酶7抗體 ?0.2ml
FUZ/FUZZY 英文名稱: 眼睛和頭發顏色相關蛋白FUZ抗體 ?0.2ml
FVT1 英文名稱: 濾泡型轉運蛋白1/II型慢淋巴白血病抗體 ?0.2ml
Phospho-FGFR1(Tyr653 + Tyr654) 英文名稱: 磷酸化堿成纖維細胞生長因子受體1抗體 ?0.1ml
FAM65B 英文名稱: FAM65B蛋白抗體 ?0.2ml
FAM20C 英文名稱: 胞外分泌型*/*蛋白激酶FAM20C抗體 ?0.2ml
Factor VIII B chain 英文名稱: *8/第八*/第八因子相關抗原抗體 ?0.1ml
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