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293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP培養

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-19 16:41:35瀏覽次數:270次

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產品簡介

293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP培養,細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

產品名稱293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP培養
形態特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性    
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法   1:2~1:3傳代。
傳代情況  C3
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:12,14;D16S539:9,13,14;D18S51:16,17,18,19;D19S433:17,18,OL;D21S11:28,30.2;D2S1338:18,19;D3S1358:15,16,17;D5S818:8,9;D7S820:10,11;D8S1179:12,14;FGA:22,23,24;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,17,18,19,20,21;
同工酶  
染色體  
使用權限  B類

293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP培養復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
sRANKL(Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand) ELISA Kit  人可溶核因子κB受體活化因子配基    Multi-class antibodies    規格:     48T
1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3(Human 1,25-dihydroxyvitamin D3) ELISA Kit  人1,25二羥基*3    Multi-class antibodies    規格:     48T
Human histon-H2b ELISA Kit  人組蛋白H2b    Multi-class antibodies    規格:     48T
OPG(Human Osteoprotegerin) ELISA KIT  人骨保護素    Multi-class antibodies    規格:     48T
BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體Ⅱ    Multi-class antibodies    規格:     48T
BMPR-1A(Human Bone morphogenetic protein receptor 1A) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體1A    Multi-class antibodies    規格:     48T
BMP-4(Human Bone morphogenetic protein 4) ELISA Ki  人骨成型蛋白4    Multi-class antibodies    規格:     48T
BMP-2(Human Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit  人骨成型蛋白2    Multi-class antibodies    規格:     48T
cAMP(Human cyclic adenosine monophosphate) ELISA Kit  人*    Multi-class antibodies    規格:     48T
MASP(Human mannan binding lectin associated serine protease) ELISA Kit  人甘露聚糖結合凝集素相關*蛋白酶    Multi-class antibodies    規格:     48T
CDK-7(Human Cyclin-dependent kinase 7) ELISA Kit  人周期素依賴激酶7    Multi-class antibodies    規格:     48TGRIM19    英文名稱:    干擾素/維甲酸誘導凋亡相關基因抗體    ?0.1ml
phospho-GAB2 (Ser623)    英文名稱:    磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體    ?0.1ml
GALNT13    英文名稱:    多肽N-乙酰氨基半乳糖轉移酶13抗體    ?0.2ml
gamma Adaptin    英文名稱:    銜接蛋白γ/γ1-Adaptin抗體    ?0.2ml
GALE    英文名稱:    半乳糖瓦爾登轉化酶抗體    ?0.2ml
Galectin 10    英文名稱:    半乳糖凝集素10抗體    ?0.2ml
GALK2    英文名稱:    半乳糖激酶2抗體    ?0.2ml
GALM    英文名稱:    半乳糖脫氫酶抗體    ?0.2ml
GALNS    英文名稱:    *裂解酶抗體    ?0.2ml
293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP培養GALNT10    英文名稱:    多肽N-乙酰氨基半乳糖轉移酶10抗體    ?0.2ml
GALNT11    英文名稱:    多肽N-乙酰氨基半乳糖轉移酶11抗體    ?0.2ml
GALNT12    英文名稱:    多肽N-乙酰氨基半乳糖轉移酶12抗體    ?0.2ml
GALNT1    英文名稱:    多肽N-乙酰氨基半乳糖轉移酶1抗體    ?0.2ml

 

 


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